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xieqi316銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
超聲破碎細(xì)胞
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最近在側(cè)細(xì)胞內(nèi)SOD值 需要破碎細(xì)胞 想問下 說明書上說破碎15分鐘 40-60w 但是沒有說具體工作幾秒停幾秒 還有我要測18個樣 15分鐘這個時間也太長了 對于先超聲好的樣品里的酶是不是有影響呀？ 想問下 又沒有做過這方面的 提供下經(jīng)驗(yàn) 謝謝 |
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kedaxiaoyu
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【答案】應(yīng)助回帖
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破碎，本人還是有點(diǎn)小經(jīng)驗(yàn)的，與你分享下吧！（我這個適合于大樣品的處理，小樣品的沒試過） a.超聲破碎整個過程需要在冰水混合物的冰浴上進(jìn)行！水不要多也不要太少！ b.破碎前，加少量溶菌酶和核酸酶。溶菌酶可以減少破菌時間，核酸酶可以水解核酸。還可以加點(diǎn)還原劑，如果你的半胱氨酸較多的話；也可以加點(diǎn)蛋白酶抑制劑！ c.超生破碎參數(shù)要設(shè)置恰當(dāng)，一般間隙需要是超聲的2倍，建議選擇6s間隙，和3s破碎！如果樣品量少于100ml， 建議500W超聲20min，大概就行了！溶液就澄清了，不會那么粘！�。∪绻麥啙�，但不粘，可能是包涵體！ d.破碎時，溫度要控制好！過10min，攪拌一下樣品，不要使樣液溫度很高，碰一下燒杯壁就能感覺到！如果溫度高，那就先暫停一下，等溫度降低，并且確保在冰浴中！或者改變超聲參數(shù)，改為10s間隙，5s破碎，全程20~25min！ f.破碎完的蛋白離心之后要立即純化，因?yàn)槠扑楹�，樣液中可能有許多蛋白酶，長時間放置會降解蛋白！ |
14樓2013-05-10 22:54:47
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