 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 4829 | 回復(fù): 17 | |||
| 本帖產(chǎn)生 1 個 BioEPI ，點擊這里進行查看 | |||
wapw1987新蟲 (小有名氣)
|
[求助]
gst標簽蛋白的表達和純化
|
||
| 有沒有高人做過GST標簽的蛋白的表達和純化，能不能給點建議，我用的是pGEX質(zhì)粒，需要在什么菌株中表達，純化時用什么方法收集提純呢？ |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 蛋白質(zhì)生物學(xué)實驗經(jīng)驗 |
» 猜你喜歡
一志愿河北工業(yè)大學(xué)0817化工278分求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
化學(xué)308分求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
085600材料與化工調(diào)劑
已經(jīng)有11人回復(fù)
-
335分 | 材料與化工專碩 | GPA 4.07 | 有科研經(jīng)歷
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
一志愿武理材料工程348求調(diào)劑
已經(jīng)有9人回復(fù)
-
279分求調(diào)劑 一志愿211
已經(jīng)有18人回復(fù)
-
0703化學(xué)求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
材料292調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
一志愿陜師大生物學(xué)071000，298分，求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
306求0703調(diào)劑一志愿華中師范
已經(jīng)有7人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- GST標簽樹脂蛋白純化說明書
已經(jīng)有107人回復(fù)
- GST融合蛋白表達純化
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 蛋白互作必會，GST純化遇到的問題
已經(jīng)有13人回復(fù)
- gst標簽，蛋白純化
已經(jīng)有25人回復(fù)
- GST融合蛋白純化求助 �。。�
已經(jīng)有19人回復(fù)
- 【求助/交流】原核表達蛋白分子量偏大
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 【求助/交流】帶GST標簽的重組蛋白的純化？
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 【求助/交流】大腸桿菌中蛋白表達量偏低，大家有什么建議？
已經(jīng)有28人回復(fù)
- 【求助/交流】誰知道如何去除GST標簽啊，幫幫忙啊，急！
已經(jīng)有4人回復(fù)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
wapw1987: 回帖置頂 2011-12-25 15:12:27
wapw1987(金幣+2): ★★★★★最佳答案 2011-12-25 15:31:24
linyingjia(金幣+5, BioEPI+1, 專家考核): 很好 2011-12-27 20:30:24
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
wapw1987: 回帖置頂 2011-12-25 15:12:27
wapw1987(金幣+2): ★★★★★最佳答案 2011-12-25 15:31:24
linyingjia(金幣+5, BioEPI+1, 專家考核): 很好 2011-12-27 20:30:24
|
1. 轉(zhuǎn)8ml過夜小搖菌液接入800ml含氨芐的LB培養(yǎng)基（2L錐形瓶）, 37度搖菌至OD600至 0.6。 2. 誘導(dǎo)前取1ml菌液，也可使用轉(zhuǎn)入其它質(zhì)粒的未誘導(dǎo)的BI21菌株作對照。 這是沒有誘導(dǎo)的對照，5000rpm，5min去上清，菌體用50 μl SDS loading buffer重懸，放置于－20度備用。 3. 加IPTG誘導(dǎo)蛋白表達，使其中濃度達0.1mM。 4. 室溫誘導(dǎo)過夜（8小時左右），取1ml菌液。 這是誘導(dǎo)后的對照，5000rpm，5min去上清，菌體用100μl SDS loading buffer重懸，放置于－20度備用。 5. 使用冷凍離心機4000g，4度離心20分鐘，去上清。（除去LB培養(yǎng)基） 6. 將-20度保存的菌體放在冰上15min，用lysis buffer重懸。（1g菌體用2到5ml lysis buffer） 7. 加溶菌酶，使其終濃度達1mg/ml，放置于冰上30min。 8. 超聲破碎細胞（冰上進行），工作2s停1s，60s每循環(huán)，重復(fù)四次。 9. 10000g，4度離心30min。 11. 從上清中取出20μl，加5μl SDS loading buffer，放置于－20度備用。 Beads的預(yù)處理： 1） 將600μl 50％的Ni-NTA slurry/ Glutation Sepharose 4B加入層析柱，打開底部的的蓋子，除去酒精。 2） 4ml 無菌水洗柱3－4次（間隔：4度 rotate10min） 3） Lysis buffer 洗柱2次（同上） 12. 將剩余裂解液加0.3ml beads，4度冰箱rotate 2hr。 13. 裝柱 14. 用4ml Wash buffer洗beads（目的是洗掉非特異吸附），4度冰箱rotate 10min，重復(fù)洗四次，最后一次離心留少許上清。（因為有可能beads對融合蛋白的結(jié)合不強，所以每一步都保留上清） 每次洗脫都要取20 μl，加5μl 5*SDS loading buffer。放置于－20度備用。 15. 使用300μl Elution buffer洗柱（可根據(jù)情況，適量增加洗脫體積），4度冰箱rotate 10min，重復(fù)洗四次，每次都用一個EP管接收。分析每次洗脫的蛋白量，實驗要在冰上進行。 每次洗脫都要取5μl，加5μl 2*SDS loading buffer，放置于－20度備用。 16. 10％SDS PAGE檢測。 17. 檢測蛋白濃度 |
4樓2011-12-25 01:02:41
Dionysius
木蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 16 (小學(xué)生)
- 金幣: 2431.3
- 散金: 449
- 紅花: 2
- 帖子: 216
- 在線: 177.7小時
- 蟲號: 1546717
- 注冊: 2011-12-21
- 專業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
2樓2011-12-24 10:14:02
xhjggl
木蟲 (正式寫手)
- BioEPI: 1
- 應(yīng)助: 43 (小學(xué)生)
- 金幣: 2889.3
- 散金: 150
- 紅花: 7
- 帖子: 556
- 在線: 190.9小時
- 蟲號: 95496
- 注冊: 2005-10-04
- 性別: GG
- 專業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
3樓2011-12-24 21:17:50
5樓2011-12-25 01:05:15
wapw1987
新蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 198
- 散金: 2
- 帖子: 168
- 在線: 32.9小時
- 蟲號: 1204622
- 注冊: 2011-02-16
- 性別: GG
- 專業(yè): 動物遺傳學(xué)
6樓2011-12-25 15:32:26
落明逐暗
金蟲 (正式寫手)
好吃嘴班班長
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 13196.2
- 散金: 4
- 帖子: 421
- 在線: 99.7小時
- 蟲號: 742854
- 注冊: 2009-04-08
- 性別: MM
- 專業(yè): 微生物與生化藥學(xué)
7樓2011-12-26 13:21:52
linyingjia
至尊木蟲 (職業(yè)作家)
- BioEPI: 3
- 應(yīng)助: 105 (高中生)
- 貴賓: 0.139
- 金幣: 24730.4
- 散金: 1
- 紅花: 22
- 帖子: 3968
- 在線: 234.5小時
- 蟲號: 668860
- 注冊: 2008-12-05
- 性別: GG
- 專業(yè): 細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)
8樓2011-12-27 20:30:47
wapw1987
新蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 198
- 散金: 2
- 帖子: 168
- 在線: 32.9小時
- 蟲號: 1204622
- 注冊: 2011-02-16
- 性別: GG
- 專業(yè): 動物遺傳學(xué)
9樓2011-12-30 09:38:30
落明逐暗
金蟲 (正式寫手)
好吃嘴班班長
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 13196.2
- 散金: 4
- 帖子: 421
- 在線: 99.7小時
- 蟲號: 742854
- 注冊: 2009-04-08
- 性別: MM
- 專業(yè): 微生物與生化藥學(xué)
10樓2011-12-30 09:54:43
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 wapw1987 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 0703化學(xué)求調(diào)劑 +4 | 奶油草莓. 2026-03-22 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 298-一志愿中國農(nóng)業(yè)大學(xué)-求調(diào)劑 +10 | 手機用戶 2026-03-17 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 招08考數(shù)學(xué) +6 | laoshidan 2026-03-20 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 263求調(diào)劑 +6 | yqdszhdap－ 2026-03-22 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +7 | 懷瑾握瑜l 2026-03-20 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 318求調(diào)劑 +4 | plum李子 2026-03-21 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿華中科技大學(xué)071000，求調(diào)劑 +4 | 沿岸有貝殼6 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 286求調(diào)劑 +10 | Faune 2026-03-21 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +4 | 要好好無聊 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 297求調(diào)劑 +11 | 戲精丹丹丹 2026-03-17 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)297求調(diào)劑 +3 | Daisy☆ 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 266求調(diào)劑 +3 | 哇呼哼呼哼 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 330求調(diào)劑0854 +3 | assdll 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +6 | Mqqqqqq 2026-03-19 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)求調(diào)劑 +4 | 臨澤境llllll 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 332求調(diào)劑 +4 | ydfyh 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 324分 085600材料化工求調(diào)劑 +4 | llllkkkhh 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿 西北大學(xué) ，070300化學(xué)學(xué)碩，總分287，雙非一本，求調(diào)劑。 +3 | 晨昏線與星海 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +6 | 曼殊2266 2026-03-18 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿南京大學(xué)，080500材料科學(xué)與工程，調(diào)劑 +4 | Jy? 2026-03-16 | 4/200 |
|