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zk0604木蟲 (正式寫手)
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[求助]
非還原性SDS-PAGE驗(yàn)證二硫鍵存在分析，請(qǐng)高人指點(diǎn)
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為了驗(yàn)證我的蛋白通過二硫鍵形成了二聚體，我取同一管蛋白分別加入含DDT的loading buffer 和 不含DDT的loading buffer中煮沸處理再跑SDS-PAGE。結(jié)果如圖，無DDT處理組在大分子量處出現(xiàn)了一條帶，可以認(rèn)為是二聚體，但在最下面又出現(xiàn)一條小帶不知道該怎么理解（如紅箭頭所示）。如果是降解的話左邊的對(duì)照組應(yīng)該也會(huì)有。大家能不能幫忙分析一下，不勝感激�。�！ |
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建議重新來過一次以保證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確度。這里提出我的經(jīng)驗(yàn)和推測(cè)。如果蛋白質(zhì)分子內(nèi)存在二硫鍵和蛋白質(zhì)分子內(nèi)無二硫鍵的電泳遷移率存在差異。雖然差異不大，但可以肉眼可分辨了。這種解釋用來監(jiān)控蛋白質(zhì)折疊，貌似也可以符合你的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。無DTT樣品中存在可能至少三種二硫鍵狀況的分子。不過建議重來。 [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
8樓2012-06-30 08:07:10
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9樓2012-06-30 10:20:59
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我估計(jì)只能用結(jié)構(gòu)差異來解釋了 10樓2012-06-30 10:25:27
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