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zk0604木蟲 (正式寫手)
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[求助]
非還原性SDS-PAGE驗證二硫鍵存在分析，請高人指點
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為了驗證我的蛋白通過二硫鍵形成了二聚體，我取同一管蛋白分別加入含DDT的loading buffer 和 不含DDT的loading buffer中煮沸處理再跑SDS-PAGE。結果如圖，無DDT處理組在大分子量處出現(xiàn)了一條帶，可以認為是二聚體，但在最下面又出現(xiàn)一條小帶不知道該怎么理解（如紅箭頭所示）。如果是降解的話左邊的對照組應該也會有。大家能不能幫忙分析一下，不勝感激�。�！ |
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【答案】應助回帖
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建議重新來過一次以保證實驗的準確度。這里提出我的經(jīng)驗和推測。如果蛋白質分子內存在二硫鍵和蛋白質分子內無二硫鍵的電泳遷移率存在差異。雖然差異不大，但可以肉眼可分辨了。這種解釋用來監(jiān)控蛋白質折疊，貌似也可以符合你的實驗結果。無DTT樣品中存在可能至少三種二硫鍵狀況的分子。不過建議重來。 [ 發(fā)自手機版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
8樓2012-06-30 08:07:10
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我估計只能用結構差異來解釋了 10樓2012-06-30 10:25:27
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