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starseeker銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
關(guān)于提取液體樣品DNA的問題
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我是新人，在暑假提前到了實(shí)驗(yàn)室，然后老板送來一份液體麥精和玉米糖漿的樣品，說讓我提取一下DNA。我找了一下，發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室里沒有現(xiàn)成的提取液體物質(zhì)DNA方法，就先用CTAB法試試。 現(xiàn)在最主要的問題是在放入異丙醇沉淀時，離心后看不到沉淀，硬著頭皮往下做結(jié)果基本都是提不到東西。請問這種情況應(yīng)該怎么解決？是不是糖類物質(zhì)造成了干擾？我把我的實(shí)驗(yàn)步驟貼上來，請大家?guī)臀覅⒖枷拢x謝。 （1)取3g 液體樣品裝入 離心管中，加6ml TES、15μL Proteinase K，55℃孵育2h，每15min 渦旋混勻； （2)加2.3ml 5 M 的NaCl 溶液調(diào)節(jié)鹽濃度至1.4 M，加100μL 10％ CTAB， 65℃水浴10 min；12,000rpm離心10min，取上清液至 離心管中。 （3)加入等體積氯仿：異戊醇（24:1），顛倒混勻，4 ℃，12,000rpm離心10min，取上清液至離心管中； （4)加入0.55倍體積的預(yù)冷異丙醇，-20 ℃放置30 min；4 ℃，12,000rpm離 心15min，棄異丙醇； （5）（70%乙醇洗2 次）第一次加700μL，輕輕渦旋混勻，4 ℃，12,000rpm離心5min，棄乙醇；第二次加200μL，棄乙醇，4 ℃，12,000rpm離心30秒，用槍頭吸取離心管中殘留的乙醇； （6）室溫晾干，15-30分鐘，至無乙醇味。 （7）加100μL ddH2O熔解，-20 ℃凍存待用。 |
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