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Marado金蟲 (正式寫手)
Dreamer
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[求助]
連接頻頻出問題,有沒有高人指點(diǎn)一下 已有2人參與
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本人要連一段1926bp的片段到T載體pMD19-T(2692bp)上面,按理說不算大片段吧,可是連接老連不上去,第一次連的時(shí)候考慮到目的片段回收后濃度不大,所以加大了模板的量,做了模板:T載體,5:1,7:1,10:1三個(gè)梯度,菌倒是長(zhǎng)了不少,挑了5個(gè)單菌落,驗(yàn)證后發(fā)現(xiàn)都沒有連上![]() 昨天第二次連接,做了兩種體系,連接體系如下: 體系一 模板:2ul T載體:0.5ul solution I:3.5ul 體系二 模板:2.5ul T載體:0.5ul solution I:3.5ul 連接時(shí)間10h,涂氨芐平板過夜 今天一看平板發(fā)現(xiàn)就體系一兩個(gè)平板長(zhǎng)了,加起來才三個(gè)菌落 還說不準(zhǔn)三個(gè)都是陽性克隆 挑出來了,準(zhǔn)備明早驗(yàn)證了.有誰推薦個(gè)體系麼,膠回收后點(diǎn)了5ul的模板跑了下看,感覺濃度還成,之前濃度更低都連得上,氨芐平板沒問題的,新配的,濃度也沒問題的,100ug/ml的終濃度,培養(yǎng)基冷卻到50℃的時(shí)候才加進(jìn)去的. |

木蟲 (著名寫手)

鐵桿木蟲 (正式寫手)
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銀蟲 (著名寫手)

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