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馬龍sweeting木蟲 (正式寫手)
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[求助]
請(qǐng)問貼壁細(xì)胞用什么固定液固定、固定多長(zhǎng)時(shí)間~~
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| 請(qǐng)問貼壁細(xì)胞用什么固定液固定、固定多長(zhǎng)時(shí)間~~我固定后是要進(jìn)行染色檢測(cè)凋亡和壞死~~查文獻(xiàn)有在染完色再固定的，用的是甲醇和冰醋酸~~但不知道固定多長(zhǎng)時(shí)間~~請(qǐng)高手指教~~ |
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yangliguo007
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5樓2012-07-13 16:03:29
馬龍sweeting
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6樓2012-08-07 15:19:25
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【答案】應(yīng)助回帖
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我們這里測(cè)凋亡和壞死的時(shí)候一般都是雙染法測(cè)的。PI和AnexinV 大概的步驟是 1、調(diào)整待檢測(cè)細(xì)胞濃度為106個(gè)/ml，取200ul， 1000rpm×5min(4℃)。 2、預(yù)冷的PBS1ml 潤(rùn)洗兩次2，1000rpm×5min(4℃)。 3、將細(xì)胞重懸于100ul binding buffer，加入2ulAnnexin-V-FITC(20ug/ml)，輕輕混勻，避光冰上放置15分鐘。 4、轉(zhuǎn)至流式檢測(cè)管，加入400ulPBS，每個(gè)樣品臨上機(jī)前加入1ulPI（50ug/ml），2分鐘后迅速檢測(cè)。 5、同時(shí)以不加Annexin V-FITC 及PI 的一管作為陰性對(duì)照。 這里說的PBS洗 就是直接在貼壁的情況下，然后就會(huì)傳代的時(shí)候用PBS洗是一樣的。 |
7樓2012-08-07 22:20:56
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