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nmhsd

木蟲 (正式寫手)


[交流] 表達一個酶的催化亞基,要求有活性

實驗所需,要做一個酶的表達。要求表達的這個酶有生物活性,易分離提取,預算問題暫不予考慮。本實驗室有Sf-9昆蟲細胞系,其他表達載體等均需購買,F(xiàn)主要有以下問題。
1選用什么樣的表達系統(tǒng),大腸桿菌?酵母?昆蟲桿狀病毒?還是逐一去嘗試?
2表達載體那些可以去找人要,有些必須從公司購買?
另外實驗周期不要太長,沒有太多時間了,盡量能在2個月之內(nèi)完成。不知做過表達的前輩們能否指教小弟一二。
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dshlove

木蟲 (正式寫手)


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小丹木木: 金幣+3, 鼓勵交流經(jīng)驗 2012-07-16 13:43:23
nmhsd: 金幣+3, 大腸桿菌確實太容易表達了,剛做了,只可惜都是包涵體,沒活性 2012-10-01 00:17:50
個人覺得,表達系統(tǒng)可以先試試大腸桿菌的,如果能表達就最好了,畢竟其他兩個系統(tǒng)相對麻煩。
載體,你可以拿自己實驗室的先構(gòu)建,需要的但是沒有的就和別人交換,實在不行只能買商業(yè)化的了。
昆蟲細胞,周期太長了啊。不順利的話,還不知道什么時候出來,酵母我沒做過,大腸桿菌的做的比較多,畢竟比較成熟,周期短。
2樓2012-07-16 09:11:05
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王禮鵬

金蟲 (小有名氣)


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小丹木木: 金幣+2, 鼓勵交流 2012-07-16 13:43:36
nmhsd: 金幣+5, 謝謝 2012-10-01 00:18:19
我認為要有活性用昆蟲sf9細胞表達較好,因為真核表達系統(tǒng)有正確的折疊和修飾,對活性的維持有一定的作用。大腸桿菌好像容易形成包涵體,個人感覺比較麻煩。呵呵
3樓2012-07-16 09:29:22
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nmhsd

木蟲 (正式寫手)


引用回帖:
2樓: Originally posted by dshlove at 2012-07-16 09:11:05
個人覺得,表達系統(tǒng)可以先試試大腸桿菌的,如果能表達就最好了,畢竟其他兩個系統(tǒng)相對麻煩。
載體,你可以拿自己實驗室的先構(gòu)建,需要的但是沒有的就和別人交換,實在不行只能買商業(yè)化的了。
昆蟲細胞,周期太長了 ...

找同學要了一個pET-20a,及BL21大腸桿菌,正在構(gòu)建載體,同時訂購了Bac-to-Bac系統(tǒng),估計一個月才能到貨。
4樓2012-07-19 22:02:06
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nmhsd

木蟲 (正式寫手)


引用回帖:
3樓: Originally posted by 王禮鵬 at 2012-07-16 09:29:22
我認為要有活性用昆蟲sf9細胞表達較好,因為真核表達系統(tǒng)有正確的折疊和修飾,對活性的維持有一定的作用。大腸桿菌好像容易形成包涵體,個人感覺比較麻煩。呵呵

時間不等人啊,直接訂購了Bac-to-Bac表達系統(tǒng)。等試劑期間打算先用大腸桿菌表達一下
5樓2012-07-19 22:04:19
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dshlove

木蟲 (正式寫手)


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nmhsd: 金幣+1 2012-10-10 18:12:24
引用回帖:
5樓: Originally posted by nmhsd at 2012-07-19 22:04:19
時間不等人啊,直接訂購了Bac-to-Bac表達系統(tǒng)。等試劑期間打算先用大腸桿菌表達一下...

你大腸桿菌用低溫誘導的么,改改條件,如果還是那樣的話就只能用Bac-to-Bac表達系統(tǒng)了。
6樓2012-10-01 19:23:11
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