 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 微生物 » 實驗/技術 » 劃線分離出的單菌落如何保存
| 查看: 5744 | 回復: 19 | |||
celia2012銅蟲 (小有名氣)
|
[求助]
劃線分離出的單菌落如何保存
|
||
| 急求~污水廠取的樣，稀釋涂布數(shù)菌后，從中挑選菌落劃線得到單菌落后，點在平板上，長出后，往后還要進行一系列試驗，現(xiàn)在不知道該如何保存，放常溫下還是放4度冰箱好啊~糾結啊，感覺有的平板上都有污染現(xiàn)象，還有的長的太大，都影響旁邊的菌了~由于本來不是生物專業(yè)的，不知道該如何處理~哪位高仁提點意見~萬分感謝啊 |
回復此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 細胞 |
» 猜你喜歡
293求調劑
已經有14人回復
-
0703化學336分求調劑
已經有6人回復
-
304求調劑
已經有9人回復
-
281求調劑（0805）
已經有8人回復
-
環(huán)境領域全國重點實驗室招收博士1-2名
已經有3人回復
-
材料專碩306英一數(shù)二
已經有10人回復
-
301求調劑
已經有6人回復
-
一志愿天津大學化學工藝專業(yè)（081702）315分求調劑
已經有7人回復
-
302求調劑
已經有6人回復
-
26博士申請
已經有3人回復
» 本主題相關價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 如何抑制放線菌培養(yǎng)時污染的真菌？
已經有22人回復
- 真菌劃線分離單菌落。
已經有6人回復
- 怎樣比較完全地提取土壤中的微生物？
已經有15人回復
- 培養(yǎng)皿雜菌去除
已經有19人回復
- 關于菌種活化的
已經有11人回復
- 急，急，急-關于菌種復壯問題
已經有32人回復
- 【求助/交流】單菌落過夜搖菌為什么搖不出來呀？急求
已經有33人回復
- 【求助/交流】霉菌的培養(yǎng)
已經有21人回復
- 【求助/交流】關于菌種分離純化問題
已經有16人回復
dongxie1982
銅蟲 (正式寫手)
- 應助: 55 (初中生)
- 金幣: 69.9
- 紅花: 1
- 帖子: 335
- 在線: 95.9小時
- 蟲號: 1514344
- 注冊: 2011-11-28
- 性別: GG
- 專業(yè): 抗腫瘤藥物藥理
【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★
感謝參與，應助指數(shù) +1
celia2012: 金幣+4, ★★★★★最佳答案 2012-07-19 10:02:44
感謝參與，應助指數(shù) +1
celia2012: 金幣+4, ★★★★★最佳答案 2012-07-19 10:02:44
|
甘油冷凍保藏法 本方法適合于中、長期菌種保藏，保藏時間一般為2-4年左右。 （1）用火焰滅菌的接種環(huán)取斜面菌種在平皿上劃線分離單菌落。 （2）平皿倒置于30℃或37℃恒溫培養(yǎng)箱，培養(yǎng)24-48小時，至單菌落的大小為3mm左右。 （3）挑取一個單菌落，接種于一個裝50mL的300mL三角瓶中30℃或37℃振蕩培養(yǎng)10-15小時，至菌密度OD600為1.0-1.5。 （4）用火焰滅菌的接種環(huán)取少量種子液，涂片后，作革蘭氏染色，在顯微鏡下觀察菌體的形態(tài)，及是否有雜菌。 （5）按30%甘油：種子液為1：1（V/V）的量加入無菌甘油， 混合后分裝至事先滅菌的菌種保存管（1-2mL/管），-70℃或液氮保存。 冷凍干燥保藏法 �。�1）準備安瓿管用于冷凍干燥菌種保藏的安瓿管宜采用中性玻璃制造，形狀可用長頸球形底的，亦稱淚滴型安瓿管，大小要求外徑6-7.5mm，長105mm，球部直徑9-11mm，壁厚0.6-1.2mm。也可用沒有球部的管狀安瓿管。塞好棉塞，1.05kg/cm2，121.3℃滅菌30分鐘，備用。 �。�2）準備菌種，用冷凍干燥法保藏的菌種，其保藏期可達數(shù)年至十數(shù)年，為了在許多年后不出差錯，故所用菌種要特別注意其純度，即不能有雜菌污染，然后在最適培養(yǎng)基中用最適溫度培養(yǎng)，使培養(yǎng)出良好的培養(yǎng)物。細菌和酵母的菌齡要求超過對數(shù)生長期，若用對數(shù)生長期的菌種進行保藏，其存活率反而降低。一般，細菌要求24—48小時的培養(yǎng)物；酵母需培養(yǎng)3天；形成孢子的微生物則宜保存孢子；放線菌與絲狀真菌則培養(yǎng)7-10天。 �。�3）制備菌懸液與分裝以細菌斜面為例，用脫脂牛乳2ml左右加入斜面試管中，制成濃菌液，每支安瓿管分裝0.2ml。 （4）冷凍冷凍干燥器有成套的裝置出售，價值昂貴，此處介紹的是簡易方法與裝置，可達到同樣的目的。 將分裝好的安瓿管放低溫冰箱中冷凍，無低溫冰箱可用冷凍劑如干冰（固體CO2）酒精液或干冰丙酮液，溫度可達-70℃。將安瓿管插入冷凍劑，只需冷凍4-5分鐘，即可使懸液結冰。 �。�5）真空干燥為在真空干燥時使樣品保持凍結狀態(tài)，需準備冷凍槽，槽內放碎冰塊與食鹽，混合均勻，可冷至-15℃。裝置儀器，安瓿管放入冷凍槽中的干燥瓶內。 抽氣一般若在30分鐘內能達到93.3Pa（0.7mmHg）真空度時，則干燥物不致熔化，以后再繼續(xù)抽氣，幾小時內，肉眼可觀察到被干燥物已趨干燥，一般抽到真空度26.7Pa（0.2mmHg），保持壓力6-8小時即可。 （6）封口抽真空干燥后，取出安瓿管，接在封口用的玻璃管上，可用L形五通管繼續(xù)抽氣，約10分鐘即可達到26.7Pa（0.2mmHg）。于真空狀態(tài)下，以煤氣噴燈的細火焰在安瓿管頸中央進行封口。封口以后，保存于冰箱或室溫暗處。 此法為菌種保藏方法中最有效的方法之一，對一般生活力強的微生物及其孢子以及無芽胞菌都適用，即使對一些很難保存的致病菌，如腦膜炎球菌與淋病球菌等亦能保存。適用于菌種長期保存，一般可保存數(shù)年至十余年，但設備和操作都比較復雜。 濾紙保藏法 �。�1）將濾紙剪成0.5×1.2cm的小條，裝入0．6×8cm的安瓿管中，每管1-2張，塞以棉塞，1.05kg/cm2，121.3℃滅菌30分鐘。 （2）將需要保存的菌種，在適宜的斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)，使充分生長。 �。�3）取滅菌脫脂牛乳1-2ml滴加在滅菌培養(yǎng)皿或試管內，取數(shù)環(huán)菌苔在牛乳內混勻，制成濃懸液。 �。�4）用滅菌鑷子自安瓿管取濾紙條浸入菌懸液內，使其吸飽，再放回至安瓿管中，塞上棉塞。 （5）將安瓿管放入內有五氧化二磷作吸水劑的干燥器中，用真空泵抽氣至干。 �。�6）將棉花塞入管內，用火焰熔封，保存于低溫下。 �。�7）需要使用菌種，復活培養(yǎng)時，可將安瓿管口在火焰上燒熱，滴一滴冷水在燒熱的部位，使玻璃破裂，再用鑷子敲掉口端的玻璃，待安瓿管開啟后，取出濾紙，放入液體培養(yǎng)基內，置溫箱中培養(yǎng)。 細菌、酵母菌、絲狀真菌均可用此法保藏，前兩者可保藏2年左右，有些絲狀真菌甚至可保藏14-17年之久。此法較液氮、冷凍干燥法簡便，不需要特殊設備。 濾紙保藏法 �。�1）將濾紙剪成0.5×1.2cm的小條，裝入0．6×8cm的安瓿管中，每管1-2張，塞以棉塞，1.05kg/cm2，121.3℃滅菌30分鐘。 （2）將需要保存的菌種，在適宜的斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)，使充分生長。 �。�3）取滅菌脫脂牛乳1-2ml滴加在滅菌培養(yǎng)皿或試管內，取數(shù)環(huán)菌苔在牛乳內混勻，制成濃懸液。 �。�4）用滅菌鑷子自安瓿管取濾紙條浸入菌懸液內，使其吸飽，再放回至安瓿管中，塞上棉塞。 �。�5）將安瓿管放入內有五氧化二磷作吸水劑的干燥器中，用真空泵抽氣至干。 （6）將棉花塞入管內，用火焰熔封，保存于低溫下。 �。�7）需要使用菌種，復活培養(yǎng)時，可將安瓿管口在火焰上燒熱，滴一滴冷水在燒熱的部位，使玻璃破裂，再用鑷子敲掉口端的玻璃，待安瓿管開啟后，取出濾紙，放入液體培養(yǎng)基內，置溫箱中培養(yǎng)。 細菌、酵母菌、絲狀真菌均可用此法保藏，前兩者可保藏2年左右，有些絲狀真菌甚至可保藏14-17年之久。此法較液氮、冷凍干燥法簡便，不需要特殊設備。 沙土保藏法 �。�1）取河沙加入10％稀鹽酸，加熱煮沸30分鐘，以去除其中的有機質。 （2）倒去酸水，用自來水沖洗至中性。 （3）烘干，用40目篩子過篩，以去掉粗顆粒，備用。 �。�4）另取非耕作層的不含腐植質的瘦黃土或紅土，加自來水浸泡洗滌數(shù)次，直至中性。 �。�5）烘干，碾碎，通過100目篩子過篩，以去除粗顆粒。 �。�6）按一份黃土、三份沙的比例（或根據(jù)需要而用其他比例，甚至可全部用沙或全部用土）摻合均勻，裝入10×100mm的小試管或安瓿管中，每管裝1g左右，塞上棉塞，進行滅菌，烘干。 （7）抽樣進行無菌檢查，每10支沙土管抽一支，將沙土倒入肉湯培養(yǎng)基中，37℃培養(yǎng)48小時，若仍有雜菌，則需全部重新滅菌，再作無菌試驗，直至證明無菌，方可備用。 �。�8）選擇培養(yǎng)成熟的（一般指孢子層生長豐滿的，營養(yǎng)細胞用此法效果不好）優(yōu)良菌種，以無菌水洗下，制成孢子懸液。 �。�9）于每支沙土管中加入約0.5ml（一般以剛剛使沙土潤濕為宜）孢子懸液，以接種針拌勻。 �。�10）放入真空干燥器內，用真空泵抽干水分，抽干時間越短越好，務使在12小時內抽干。 �。�11）每10支抽取一支，用接種環(huán)取出少數(shù)沙粒，接種于斜面培養(yǎng)基上，進行培養(yǎng)，觀察生長情況和有無雜菌生長，如出現(xiàn)雜菌或菌落數(shù)很少或根本不長，則說明制作的沙土管有問題，尚須進一步抽樣檢查。 �。�12）若經檢查沒有問題，用火焰熔封管口，放冰箱或室內干燥處保存。每半年檢查一次活力和雜菌情況。 �。�13）需要使用菌種，復活培養(yǎng)時，取沙土少許移入液體培養(yǎng)基內，置溫箱中培養(yǎng)。 此法多用于能產生孢子的微生物如霉菌、放線菌，因此在抗生素工業(yè)生產中應用最廣，效果亦好，但應用于營養(yǎng)細胞效果不佳。 斜面低溫保藏法 將菌種接種在適宜的固體斜面培養(yǎng)基上，待菌充分生長后，棉塞部分用油紙包扎好，移至2-8℃的冰箱中保藏。 保藏時間依微生物的種類而有不同，霉菌、放線菌及有芽孢的細菌保存2-4個月，移種一次。酵母菌兩個月，移種一次。細菌最好每月移種一次。 此法為實驗室和工廠菌種室常用的保藏法，優(yōu)點是操作簡單，使用方便，不需特殊設備，能隨時檢查所保藏的菌株是否死亡、變異與污染雜菌等。缺點是容易變異，因為培養(yǎng)基的物理、化學特性不是嚴格恒定的，屢次傳代會使微生物的代謝改變，而影響微生物的性狀；污染雜菌的機會亦較多。 液氮冷凍保藏法 �。�1）準備安瓿管用于液氮保藏的安瓿管，要求能耐受溫度突然變化而不致破裂，因此，需要采用硼硅酸鹽玻璃制造的安瓿管，安瓿管的大小通常使用75×10mm的，或能容1.2mm液體的。 �。�2）加保護劑與滅菌保存細菌、酵母菌或霉菌孢子等容易分散的細胞時，則將空安瓿管塞上棉塞，1.05kg/cm2，121.3℃滅菌15分鐘：若作保存霉菌菌絲體用則需在安瓿管內預先加入保護劑如10％的甘油蒸餾水溶液或10％二甲亞砜蒸餾水溶液，加入量以能浸沒以后加入的菌落圓塊為限，而后再用1.05kg/cm2>，121.3℃滅菌15分鐘。 （3）接入菌種將菌種用10％的甘油蒸餾水溶液制成菌懸液，裝入已滅菌的安瓿管；霉菌菌絲體則可用滅菌打孔器，從平板內切取菌落圓塊，放入含有保護劑的安瓿管內，然后用火焰熔封。浸入水中檢查有無漏洞。 �。�4）凍結再將已封口的安瓿管以每分鐘下降1℃的慢速凍結至-30℃。若細胞急劇冷凍，則在細胞內會形成冰的結晶，因而降低存活率。 �。�5）保藏經凍結至-30℃的安瓿管立即放入液氮冷凍保藏器的小圓筒內，然后再將小圓筒放入液氮保藏器內。液氮保藏器內的氣相為-150℃，液態(tài)氮內為-196℃。 �。�6）恢復培養(yǎng)保藏的菌種需要用時，將安瓿管取出，立即放入38-40℃的水浴中進行急劇解凍，直到全部融化為止。再打開安瓿管，將內容物移入適宜的培養(yǎng)基上培養(yǎng)。 此法除適宜于一般微生物的保藏外，對一些用冷凍干燥法都難以保存的微生物如支原體、衣原體、氫細菌、難以形成孢子的霉菌、噬菌體及動物細胞均可長期保藏，而且性狀不變異。缺點是需要特殊設備。 液體石蠟保藏法 �。�1）將液體石蠟分裝于三角燒瓶內，塞上棉塞，并用牛皮紙包扎，1.05kg/cm2，121.3℃滅菌30分鐘，然后放在40℃溫箱中，使水汽蒸發(fā)掉，備用。 （2）將需要保藏的菌種，在最適宜的斜面培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使得到健壯的菌體或孢子。 （3）用滅菌吸管吸取滅菌的液體石蠟，注入已長好菌的斜面上，其用量以高出斜面頂端1cm為準，使菌種與空氣隔絕。 �。�4）將試管直立，置低溫或室溫下保存（有的微生物在室溫下比冰箱中保存的時間還要長）。 此法實用而效果好。霉菌、放線菌、芽孢細菌可保藏2年以上不死，酵母菌可保藏1-2年，一般無芽孢細菌也可保藏1年左右，甚至用一般方法很難保藏的腦膜炎球菌，在37℃溫箱內，亦可保藏3個月之久。此法的優(yōu)點是制作簡單，不需特殊設備，且不需經常移種。缺點是保存時必須直立放置，所占位置較大，同時也不便攜帶。從液體石蠟下面取培養(yǎng)物移種后，接種環(huán)在火焰上燒灼時，培養(yǎng)物容易與殘留的液體石蠟一起飛濺，應特別注意。 |
12樓2012-07-18 11:21:10
2樓2012-07-17 18:45:45
celia2012
銅蟲 (小有名氣)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 236.4
- 散金: 42
- 帖子: 116
- 在線: 54.7小時
- 蟲號: 1654655
- 注冊: 2012-03-01
- 專業(yè): 景觀與區(qū)域生態(tài)學
3樓2012-07-17 18:59:24
reallpf
木蟲 (正式寫手)
- MicEPI: 21
- 應助: 150 (高中生)
- 金幣: 3388.3
- 散金: 2
- 紅花: 12
- 帖子: 342
- 在線: 72.6小時
- 蟲號: 1892494
- 注冊: 2012-07-14
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學
4樓2012-07-17 19:04:50
celia2012
銅蟲 (小有名氣)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 236.4
- 散金: 42
- 帖子: 116
- 在線: 54.7小時
- 蟲號: 1654655
- 注冊: 2012-03-01
- 專業(yè): 景觀與區(qū)域生態(tài)學
5樓2012-07-17 19:07:20
其實做菌種凍干粉挺好的，用的時候也簡便！ 6樓2012-07-17 19:13:55
celia2012
銅蟲 (小有名氣)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 236.4
- 散金: 42
- 帖子: 116
- 在線: 54.7小時
- 蟲號: 1654655
- 注冊: 2012-03-01
- 專業(yè): 景觀與區(qū)域生態(tài)學
7樓2012-07-17 19:21:17
laozuzunzhe
鐵桿木蟲 (著名寫手)
- MicEPI: 2
- 應助: 122 (高中生)
- 貴賓: 0.382
- 金幣: 9981.5
- 散金: 355
- 紅花: 12
- 沙發(fā): 3
- 帖子: 1118
- 在線: 313.6小時
- 蟲號: 1624374
- 注冊: 2012-02-18
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物學
8樓2012-07-17 19:33:47
9樓2012-07-17 21:24:39
renyanli
木蟲 (正式寫手)
都教授
- 應助: 12 (小學生)
- 金幣: 6377.4
- 散金: 45
- 紅花: 2
- 帖子: 683
- 在線: 439.2小時
- 蟲號: 1326950
- 注冊: 2011-06-19
- 性別: GG
- 專業(yè): 環(huán)境污染化學
10樓2012-07-18 10:19:01
相關版塊跳轉
我要訂閱樓主 celia2012 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 0703化學336分求調劑 +5 | zbzihdhd 2026-03-15 | 6/300 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 302求調劑 +9 | 負心者當誅 2026-03-11 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 本人考085602 化學工程 專碩 +16 | 不知道叫什么！ 2026-03-15 | 18/900 |
|
|
|
[考研] 有沒有道鐵/土木的想調劑南林，給自己招師弟中～ +3 | TqlXswl 2026-03-16 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 梁成偉老師課題組歡迎你的加入 +8 | 一鴨鴨喲 2026-03-14 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 一志愿南京大學，080500材料科學與工程，調劑 +4 | Jy? 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料專碩274一志愿陜西師范大學求調劑 +5 | 薛云鵬 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 考研調劑 +3 | 淇ya_~ 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 267一志愿南京工業(yè)大學0817化工求調劑 +6 | SUICHILD 2026-03-12 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 化學調劑0703 +8 | 啊我我的 2026-03-11 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 285求調劑 +6 | ytter 2026-03-12 | 6/300 |
|
|
|
[考研]
 機械專碩調劑
+3
|
笨笨兔子 2026-03-12 | 3/150 |
|
|
|
[考研] ［0860］321分求調劑，ab區(qū)皆可 +4 | 寶貴熱 2026-03-13 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 304求調劑 +7 | 7712b 2026-03-13 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 四川大學085601材料工程專碩 初試294求調劑 +4 | 祝我們好在冬天 2026-03-11 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 26調劑/材料科學與工程/總分295/求收留 +9 | 2026調劑俠 2026-03-12 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 290求調劑 +7 | ADT 2026-03-12 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 工科調劑 +4 | Jiang191123！ 2026-03-11 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 308求調劑 +3 | 是Lupa啊 2026-03-12 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 化工學碩306求調劑 +9 | 42838695 2026-03-12 | 9/450 |
|