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lijun31823

木蟲 (小有名氣)

[求助] 【求助】紫外分光光度計測定,這樣的情況如何確定最佳吸收波長呢?謝謝

昨天重新測了,沒有自動掃描的,手動測。沒有最大吸收波長,只有最低的,而且數(shù)據(jù)波動很大。
波長        A
200        0.917
205        0.908
210        0.717
215        0.511
220        0.345
225        0.217
230        0.13
235        0.078
240        0.048
245        0.033
250        0.028
255        0.028
260        0.035
270        0.028
280        0.03
290        0.022
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wddmq

木蟲 (正式寫手)

【答案】應(yīng)助回帖


感謝參與,應(yīng)助指數(shù) +1
lijun31823: 金幣+1, ★★★很有幫助 2012-07-19 09:34:13
選擇檢測波長一般選擇吸收曲線上斜率小的地方,如峰頂或峰谷,這樣略微的儀器偏差不會造成太大的影響;
另外因為檢測的吸收度要適中,如果樣品溶液濃度很大又不想要稀釋,可以選擇吸收小一點的波長處(或者用薄一點的比色皿);同理,如果濃度本身就很小就不能選擇吸收很弱的波長。
在檢測波長避免有別的物質(zhì)的干擾,特別是紫外檢測,即溶劑或是溶液中的其它成分在此波長下無吸收或是吸收較弱。
1234
2樓2012-07-19 09:18:30
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普通回帖

wddmq

木蟲 (正式寫手)

【答案】應(yīng)助回帖

★ ★ ★
soundhorizo: 金幣+3, 專家辛苦 ^^ 2012-07-19 10:56:09
像你給出的這組數(shù)據(jù),200nm處及245之后都較為平坦,但前者估計其它物質(zhì)干擾很大,后面的吸收又太弱。有點麻煩
1234
3樓2012-07-19 09:28:13
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lijun31823

木蟲 (小有名氣)

引用回帖:
2樓: Originally posted by wddmq at 2012-07-19 09:18:30
選擇檢測波長一般選擇吸收曲線上斜率小的地方,如峰頂或峰谷,這樣略微的儀器偏差不會造成太大的影響;
另外因為檢測的吸收度要適中,如果樣品溶液濃度很大又不想要稀釋,可以選擇吸收小一點的波長處(或者用薄一點 ...

吸光度不是說控制在0.2~0.8比較好嗎,我測的數(shù)值怎么都那么小呢,溶液濃度需要怎么控制才好,我做的是I+G測定,參比是0.01mol/L HCL溶液。
4樓2012-07-19 09:29:51
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lijun31823

木蟲 (小有名氣)

引用回帖:
3樓: Originally posted by wddmq at 2012-07-19 09:28:13
像你給出的這組數(shù)據(jù),200nm處及245之后都較為平坦,但前者估計其它物質(zhì)干擾很大,后面的吸收又太弱。有點麻煩

重復(fù)做了幾次了,都是這樣的趨勢,只有一臺752紫外可見分光光度計,比色皿沒問題。
5樓2012-07-19 09:31:01
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wddmq

木蟲 (正式寫手)

這個趨勢和你操作沒關(guān)系,是你的樣品本身性質(zhì)決定的。吸收在0.2~0.8確實比較好,就是這一段的斜率有點大,儀器影響估計會比較大。要不你選定這之間的一個波長,做一下加樣回收率和中間精密度,看看結(jié)果如何,如果沒問題的話,就可以用。
1234
6樓2012-07-19 11:44:06
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lijun31823

木蟲 (小有名氣)

引用回帖:
6樓: Originally posted by wddmq at 2012-07-19 11:44:06
這個趨勢和你操作沒關(guān)系,是你的樣品本身性質(zhì)決定的。吸收在0.2~0.8確實比較好,就是這一段的斜率有點大,儀器影響估計會比較大。要不你選定這之間的一個波長,做一下加樣回收率和中間精密度,看看結(jié)果如何,如果沒 ...

加樣回收率和中間精密度 是怎么做的呢?
7樓2012-07-19 12:54:11
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wddmq

木蟲 (正式寫手)

引用回帖:
7樓: Originally posted by lijun31823 at 2012-07-19 12:54:11
加樣回收率和中間精密度 是怎么做的呢?...

就和方法驗證里要做的一樣,因為你要是選了這個波長也得做方法驗證。方法驗證的做法可以參見藥典附錄和ICH。你那要是沒有可以在小木蟲上下到。你可以先看看
1234
8樓2012-07-19 13:36:27
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lijun31823

木蟲 (小有名氣)

引用回帖:
8樓: Originally posted by wddmq at 2012-07-19 13:36:27
就和方法驗證里要做的一樣,因為你要是選了這個波長也得做方法驗證。方法驗證的做法可以參見藥典附錄和ICH。你那要是沒有可以在小木蟲上下到。你可以先看看...

今天做的 增加了濃度之后測定的。能不能幫我分析下。
我現(xiàn)在不確定的是1、這個物質(zhì)能不能用來做標準曲線;
                2、最佳吸收波長怎么確定?任意濃度下 進行不同波長的吸光度測定嗎?
                3、怎么判斷儀器有沒有問題?
波長        A
200        1.41
210        1.938
220        1.885
225        1.179
230        0.67
235        0.415
240        0.318
245        0.288
250        0.277
255        0.261
260        0.241
265        0.226
270        0.213
275        0.205
280        0.188
285        0.167
290        0.15
300        0.118
330        0.09
9樓2012-07-19 14:17:21
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wddmq

木蟲 (正式寫手)

1.你還有其它可以作對照品的么?
2.最佳波長一般就是選最大吸收,但為了避免其它物質(zhì)的干擾,也會選擇其它波長。用不著用那么多不同的濃度進行不同波長的吸光度測定。首先你的確定你的檢測濃度,然后在這個濃度下選擇波長。你要是自己拿不準,給你個建議,查些同品種的文獻,看人家是用什么波長測的。
3.我這說的儀器的影響,不是儀器有問題,而是其它一些正常的偏差,比如說紫外燈預(yù)熱時間、燈的能量大小、溫度等等。
1234
10樓2012-07-19 15:32:53
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