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[求助]
PAGE膠回收的具體步驟
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各位前輩，有沒有人做過PAGE膠回收啊？我要回收甲基化的片段，已經(jīng)從膠上挖了幾十個(gè)條帶了，放在1.5ml的離心管里，-20℃冰箱�，F(xiàn)在要做回收了，有如下問題： 1.PAGE的條帶挖出來能放在-20℃冰箱嗎？一般能存放多久？ 2.回收之后還要跑PCR，要使DNA溶解出來具體怎樣處理？是加TE溶解再60℃水浴1小時(shí)嗎？一般加多少TE合適？ 3.水浴后離心要取上清跑PCR，但是一般就是取幾微升，那剩下的DNA要如何保存呢？ 還請(qǐng)各位前輩多多指點(diǎn)，這三伏天在實(shí)驗(yàn)室跑大板子不容易啊~ |
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我沒有做過蛋白電泳哎。把我銀染的方法發(fā)給你，因?yàn)槲易龅氖谴蟀遄�，你的玻璃板要是小的話可以相�?yīng)比例的減少量。 儀器和設(shè)備： 四個(gè)塑料方盒（比玻璃板面積稍大），2個(gè)2L的燒杯，搖床 試劑的準(zhǔn)備： 固定液：200ml乙醇，10ml冰醋酸，加水至2L 染色液：4g AgNO3至2L蒸餾水中 顯色液：把30g NaOH 溶于2L蒸餾水中，在使用前幾分鐘，加入終濃度為0.4%的甲醛溶液。 染色過程： 1. 固定：將附著凝膠的玻璃板放入固定液中，置于搖床上振蕩約5min； 2. 染色：將玻璃板放入準(zhǔn)備好的裝有染色液的塑料盒中，放在搖床上振蕩，染色8-12min； 3. 漂洗：將玻璃板放入蒸餾水中，漂洗1-2min,取出玻璃板，稍稍瀝干； 4. 顯色：在漂洗將要結(jié)束時(shí)，將20ml 37%甲醛加入準(zhǔn)備好的NaOH溶液中，混勻后，將玻璃板置于顯色液中，輕輕搖動(dòng)，至條帶完全清晰； 5. 晾干，拍照或者掃描保存。 |
13樓2014-01-14 16:48:56
tupac225
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xiaojo
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10樓2014-01-10 21:46:35
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