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[求助]
PAGE膠回收的具體步驟
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各位前輩,有沒有人做過PAGE膠回收?我要回收甲基化的片段,已經(jīng)從膠上挖了幾十個(gè)條帶了,放在1.5ml的離心管里,-20℃冰箱,F(xiàn)在要做回收了,有如下問題: 1.PAGE的條帶挖出來能放在-20℃冰箱嗎?一般能存放多久? 2.回收之后還要跑PCR,要使DNA溶解出來具體怎樣處理?是加TE溶解再60℃水浴1小時(shí)嗎?一般加多少TE合適? 3.水浴后離心要取上清跑PCR,但是一般就是取幾微升,那剩下的DNA要如何保存呢? 還請各位前輩多多指點(diǎn),這三伏天在實(shí)驗(yàn)室跑大板子不容易啊~ |
分子生化實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)積累 |
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我沒有做過蛋白電泳哎。把我銀染的方法發(fā)給你,因?yàn)槲易龅氖谴蟀遄樱愕牟AО逡切〉脑捒梢韵鄳?yīng)比例的減少量。 儀器和設(shè)備: 四個(gè)塑料方盒(比玻璃板面積稍大),2個(gè)2L的燒杯,搖床 試劑的準(zhǔn)備: 固定液:200ml乙醇,10ml冰醋酸,加水至2L 染色液:4g AgNO3至2L蒸餾水中 顯色液:把30g NaOH 溶于2L蒸餾水中,在使用前幾分鐘,加入終濃度為0.4%的甲醛溶液。 染色過程: 1. 固定:將附著凝膠的玻璃板放入固定液中,置于搖床上振蕩約5min; 2. 染色:將玻璃板放入準(zhǔn)備好的裝有染色液的塑料盒中,放在搖床上振蕩,染色8-12min; 3. 漂洗:將玻璃板放入蒸餾水中,漂洗1-2min,取出玻璃板,稍稍瀝干; 4. 顯色:在漂洗將要結(jié)束時(shí),將20ml 37%甲醛加入準(zhǔn)備好的NaOH溶液中,混勻后,將玻璃板置于顯色液中,輕輕搖動,至條帶完全清晰; 5. 晾干,拍照或者掃描保存。 |
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