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vaivaiann

銅蟲(chóng) (小有名氣)

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[交流] 濕地植物根際土壤微生物總DNA提取

最近在提取濕地土壤微生物總ＤＮＡ提取，參考文獻(xiàn)后想用以下步驟：稱取土壤 0. 25g 至 2mL Eppendorf 管中, 用1mL pH8. 0 的PBS 緩沖液洗滌2 次。加入玻璃珠0. 5g 和 1mL 裂解液( CTAB 5% , SDS 1%, EDTA0. 1mol/ L, N aCl 0. 1mo l/ L, pH 8. 0) , 輕微振蕩混合均勻后旋渦振蕩2min; 10000g 離心1min,吸取上清液,加入NH4Ac至濃度2.5M,混合均勻4 ℃ 保溫30min; 10000 g 離心 5min, 小心吸取上清液至干凈的 1. 5mL Eppendorf 管中, 加入等體積異丙醇, -20℃ 保溫 30min, 10000g 離心 5min, 棄上清,用 pH8. 0 的T E 溶液200微升溶解沉淀物; DNA溶液用葡聚糖凝膠 Sephadex G75 柱層析純化-20℃ 保存。
希望熟知ＤＮＡ提取的大俠幫忙看一下，這個(gè)步驟中NH4Ac和異丙醇的作用是什么，據(jù)我了解到的他們都有沉淀DNA的作用，那“加入NH4Ac至濃度2.5M,混合均勻4 ℃ 保溫30min; 10000 g 離心 5min, 小心吸取上清液至干凈的 1. 5mL Eppendorf 管中”這一步不就把ＤＮＡ都丟棄了嗎？
求助了，求助了～～～

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1樓 2012-08-06 10:35:32

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高雅麗

鐵蟲(chóng) (初入文壇)

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DNA在2mol左右的Nacl溶液中溶解度很大，估計(jì)這里醋酸鈉的作用是增大DNA的溶解度的吧，而不是沉淀DNA.

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7樓2013-04-10 15:29:52

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dodoxxc

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不知道你提土壤總dna的目的是啥，之前我們也試過(guò)一些方法，都不理想，后來(lái)還是用的試劑盒，算下來(lái)每個(gè)樣品也沒(méi)多貴，關(guān)鍵是節(jié)省了時(shí)間，提高了效率

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2樓2012-08-08 10:50:22

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vaivaiann

銅蟲(chóng) (小有名氣)

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提取之后想建基因文庫(kù)，并且也要進(jìn)行T-RFLP分析

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3樓2012-08-08 17:18:48

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wangshuswfu

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引用回帖:

3樓: Originally posted by vaivaiann at 2012-08-08 17:18:48
提取之后想建基因文庫(kù)，并且也要進(jìn)行T-RFLP分析

哪里的濕地？我也在做哦~上海還是內(nèi)蒙古？

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4樓2012-08-08 19:44:13

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