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allegro1741

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[交流] Q-PCR的CT值是在30之前可靠么？

我做一個(gè)基因的定量Q-PCR，結(jié)果兩次增加的程度不一樣，頭一次經(jīng)過(guò)10倍稀釋的CT值超過(guò)了30，第二次沒(méi)有稀釋CT值低于30，導(dǎo)師說(shuō)第一次的超過(guò)30了就不可靠，不知道大家是不是以此作為一種標(biāo)準(zhǔn)來(lái)判斷自己的實(shí)驗(yàn)結(jié)果的。

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1樓 2012-08-07 15:59:56

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shenye.judy

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allegro1741(金幣+1): 謝謝參與
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2012-08-09 14:22:44

擴(kuò)增次數(shù)越多，越有可能有非特異性產(chǎn)物。所以我們常規(guī)的PCR都是30個(gè)。q-PCR，本身就對(duì)引物的設(shè)計(jì)要求較高，并且為了更寬范圍的定量，就放到40個(gè)。
如果你確定你的產(chǎn)物沒(méi)有非特異性擴(kuò)增（主要看溶解曲線(xiàn)或者跑膠結(jié)果），那么40個(gè)也是準(zhǔn)的。
有不少taqman方法的文獻(xiàn)，最后數(shù)據(jù)分析的時(shí)候用的是35個(gè)循環(huán)之前的數(shù)據(jù)，雖然實(shí)驗(yàn)的時(shí)候都做40個(gè)。

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2樓2012-08-07 16:13:43

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allegro1741

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2樓: Originally posted by shenye.judy at 2012-08-07 16:13:43
擴(kuò)增次數(shù)越多，越有可能有非特異性產(chǎn)物。所以我們常規(guī)的PCR都是30個(gè)。q-PCR，本身就對(duì)引物的設(shè)計(jì)要求較高，并且為了更寬范圍的定量，就放到40個(gè)。
如果你確定你的產(chǎn)物沒(méi)有非特異性擴(kuò)增（主要看溶解曲線(xiàn)或者跑膠結(jié)果 ...

那兩次實(shí)驗(yàn)的結(jié)果差異太大了，一次增加6倍多，一次只增加了兩倍多，增加的樣品也不是同一個(gè)（前者是處理后48h的，后者是處理后24h的），以CT為30為標(biāo)準(zhǔn)來(lái)選擇某個(gè)數(shù)據(jù)也并不準(zhǔn)確啦？

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3樓2012-08-07 18:52:58

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shenye.judy

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allegro1741: 金幣+3 2012-08-09 17:40:08

呵呵，不打明白你的研究?jī)?nèi)容，你也沒(méi)介紹清楚。我講的只是大致原理。qPCR也算是各種期刊愿意接受的數(shù)據(jù)，所以只要你按照qPCR MIQC來(lái)做，是沒(méi)有問(wèn)題的。

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4樓2012-08-09 12:46:26

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wanle159

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小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖

引用回帖:

4樓: Originally posted by shenye.judy at 2012-08-09 12:46:26
呵呵，不打明白你的研究?jī)?nèi)容，你也沒(méi)介紹清楚。我講的只是大致原理。qPCR也算是各種期刊愿意接受的數(shù)據(jù)，所以只要你按照qPCR MIQC來(lái)做，是沒(méi)有問(wèn)題的。

請(qǐng)問(wèn)下，什么是qPCR MIQC？

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6樓2014-08-19 19:35:39

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bwangel

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小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖

在考慮到一系列可能出現(xiàn)的誤差的情況下，30以前的我們考慮，30以后的懷疑可能會(huì)不準(zhǔn)，

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7樓2014-08-20 06:56:17

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簡(jiǎn)單回復(fù)

涌動(dòng)的泉5樓

2012-08-09 14:32 回復(fù)

allegro1741(金幣+1): 謝謝參與

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