 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 4864 | 回復(fù): 14 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿(mǎn)足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話(huà)題的所有回帖 | ||
yangqi金蟲(chóng) (小有名氣)
|
[求助]
RT-PCR的cDNA不能擴(kuò)增出目的條帶，只有內(nèi)參基因能擴(kuò)增出來(lái)
|
|
|
大家好！ 我近期在做RT-PCR，一共有四個(gè)模板，來(lái)源于同一個(gè)細(xì)菌。內(nèi)參選擇的是16sRNA，另外還選擇了兩對(duì)目的基因。 提取RNA后，經(jīng)DNA酶消化后，以反轉(zhuǎn)錄后得到cDNA為模板，用普通PCR擴(kuò)增，但是只有16sRNA是在每個(gè)樣本中都可以得到的，目的基因在其中的兩個(gè)樣本中無(wú)法得到，不知道是什么原因。求各位高手解惑！ 這是我所提RNA的圖片，其中第1、2、3泳道為1、2、3樣本，后面兩個(gè)泳道為第4個(gè)樣本。 逆轉(zhuǎn)錄后得到的圖如下，基因分別為16sRNA、目的基因1和2（從右到左）。泳道有點(diǎn)糊的是DNA做的陽(yáng)參。 后面我又重新做了一次，結(jié)果更差了 希望大家批評(píng)指正，感激不盡！ 第二次的結(jié)果 第一次的結(jié)果 RNA檢測(cè)的結(jié)果 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有105人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專(zhuān)業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽(yáng)學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- rna終于提取出來(lái)了，可是反轉(zhuǎn)錄pcr（rt pcr）沒(méi)有條帶
已經(jīng)有19人回復(fù)
- 【求助】用cDNA的ORF序列以基因組DNA為模板 做PCR 為何P不出其對(duì)應(yīng)的基因組序列?
已經(jīng)有8人回復(fù)
- PCR退火溫度態(tài)度會(huì)導(dǎo)致擴(kuò)增不出目的條帶么？
已經(jīng)有4人回復(fù)
- RT-PCR時(shí)GAPDH能跑出來(lái)，但目的條帶跑不出來(lái)~~
已經(jīng)有7人回復(fù)
- RT后擴(kuò)增到的條帶出現(xiàn)非特異性，該如何處理
已經(jīng)有4人回復(fù)
- cDNA做普通PCR擴(kuò)不出條帶來(lái)
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 【求助/交流】PCR擴(kuò)增后沒(méi)有條帶是怎么回事?
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】RT-PCR總是得不到目的條帶
已經(jīng)有12人回復(fù)
- RT-PCR后的cDNA呢？
已經(jīng)有17人回復(fù)
yangqi
金蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1627.5
- 散金: 180
- 帖子: 106
- 在線: 82小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1203783
- 注冊(cè): 2011-02-15
- 性別: MM
- 專(zhuān)業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
3樓2012-08-10 16:08:39
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ...
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-08-10 13:53:30
yangqi: 金幣+100, ★★★很有幫助, 謝謝！ 2012-08-10 16:04:25
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-08-10 13:53:30
yangqi: 金幣+100, ★★★很有幫助, 謝謝！ 2012-08-10 16:04:25
|
1.樓主的基因是否為低拷貝基因？我曾經(jīng)克隆一個(gè)低拷貝基因，提了50個(gè)RNA樣品，只有3個(gè)擴(kuò)增出來(lái)了。樓主擴(kuò)增不出可能跟所提樣品太少有關(guān)系。 2.樓主的基因是否是較長(zhǎng)片段？由于RNA降解導(dǎo)致cDNA不完整，如果片段較長(zhǎng)也可能擴(kuò)增不出來(lái)，建議樓主分段設(shè)計(jì)引物進(jìn)行拼接。 3.建議使用活性較高的taq酶進(jìn)行pcr，有些高保真的酶就是擴(kuò)不出來(lái)。 4.建議樓主在目的基因內(nèi)部（最好是3‘端）設(shè)計(jì)較短序列的一對(duì)引物，對(duì)你這三個(gè)樣品進(jìn)行pcr看看。 |
2樓2012-08-10 12:50:07
4樓2012-08-10 16:12:47
yangqi
金蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1627.5
- 散金: 180
- 帖子: 106
- 在線: 82小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1203783
- 注冊(cè): 2011-02-15
- 性別: MM
- 專(zhuān)業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
5樓2012-08-10 16:28:29
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 070300化學(xué)354求調(diào)劑 +5 | 101次希望 2026-03-28 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 0703 化學(xué) 求調(diào)劑，一志愿山東大學(xué) 342 分 +4 | Shern—- 2026-03-28 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿太原理工安全工程300分，求調(diào)劑 +5 | 0857求調(diào)劑. 2026-03-24 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 085600，材料與化工321分求調(diào)劑 +9 | 大饞小子 2026-03-28 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)求調(diào)劑 +9 | 奶油草莓. 2026-03-22 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 299求調(diào)劑 +7 | 嗯嗯嗯嗯2 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +15 | hhhhxn.. 2026-03-23 | 21/1050 |
|
|
|
[考研] 0856，材料與化工321分求調(diào)劑 +12 | 大饞小子 2026-03-27 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 086502化學(xué)工程342求調(diào)劑 +6 | 阿姨復(fù)古不過(guò) 2026-03-27 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 314求調(diào)劑 +3 | 溪云珂 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑推薦 +5 | 清酒714 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[論文投稿] Journal of Mechanical Science and Technology +3 | Russ_ss 2026-03-25 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)338求調(diào)劑！ +6 | Zuhui0306 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿陜師大生物學(xué)071000，298分，求調(diào)劑 +5 | SYA！ 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 一志愿 本科 北科大 化學(xué) 343 +6 | 13831862839 2026-03-24 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 321求調(diào)劑 +6 | wasdssaa 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 打過(guò)很多競(jìng)賽，085406控制工程300分，求調(diào)劑 +3 | askeladz 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 080500求調(diào)劑 +3 | zzzzfan 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿國(guó)科過(guò)程所081700，274求調(diào)劑 +3 | 三水研0水立方 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 333求調(diào)劑 +3 | ALULU4408 2026-03-23 | 3/150 |
|