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傻子木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[交流]
【求助】哪位用TRI zol法提過(guò)櫻花的總RNA?
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| 用TRI zol法提過(guò)幾次櫻花和櫻桃的總RNA都沒(méi)提出來(lái)。哪位提過(guò)的，能不能提供一下方法? |
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9樓2007-05-24 21:31:14
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2樓2007-05-22 17:13:21
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1. 勻漿處理：將組織在液氮中磨碎，100mg加入1ml TRIzol。 2．將樣品在室溫（15-30℃）放置5分鐘。 3．4℃12000rpm離心10分鐘，取上清。 4．加入0.3ml氯仿，劇烈振蕩15秒，室溫放置3分鐘。 5．4℃12000rpm離心10分鐘。樣品分為三層：底層為黃色有機(jī)相，上層為無(wú)色水相和一個(gè)中間層。RNA主要在水相中。 6．把水相轉(zhuǎn)移到新管中，加入0.5ml異丙醇【多糖樣品加入0.25ml異丙醇和0.25ml高鹽溶液(0.8M檸檬酸鈉和1.2M NaCl)】-20℃放置20分鐘。 7．4℃15000rpm離心10分鐘，移去上清。 8．用1ml 75℅乙醇洗滌RNA沉淀，使沉淀懸浮。4℃ 8000rpm離心5分鐘，棄上清。 9．室溫放置干燥或真空抽干RNA沉淀，大約晾5-10分鐘，加入40μl DEPC水，用槍頭吸打幾次，-70℃保存。 我是按這個(gè)步驟做的，其他的樣品如煙草、番茄可以提的出來(lái)，但是櫻花、櫻桃、桃子都提不出來(lái)。 |
3樓2007-05-22 23:44:08
4樓2007-05-23 19:01:18
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