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mmzhang新蟲 (小有名氣)
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[求助]
shRNA有關(guān)的問題
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本人最近要做RNAi，計劃用shRNA來做，以前沒有做過，實驗室里也沒人會，所以想請教大家以下幾個問題： 1、應(yīng)該選擇怎樣插入的那段序列，同源性低的還是重要的功能域？ 2、多長的片段比較合適呢？老板說200bp左右，但是有些方法里說20多個核苷酸？ 3、引物設(shè)計有什么特殊要求嗎？ 請各位大俠指點迷津！謝謝！ |
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
mmzhang: 金幣+5, ★有幫助 2012-08-13 16:08:47
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
mmzhang: 金幣+5, ★有幫助 2012-08-13 16:08:47
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做RNAi一般有兩種方式，一種是體外合成dsRNA(雙鏈RNA），這種RNA長度一般是300到500bp，dsRNA導(dǎo)入到目標(biāo)內(nèi)就被dicer切割成了siRNA，大概是22-25bp,就是20多個核苷酸。 另一種就是直接合成siRNA，然后導(dǎo)入目標(biāo)內(nèi)。看你選用的方法了。 引物設(shè)計的話，你可以去分子生物學(xué)區(qū)看資源帖，有詳細(xì)解說。 |
2樓2012-08-13 08:44:36
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