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loop00木蟲(chóng) (小有名氣)
阿凡達(dá)
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[求助]
ELISA 顯色液空白OD偏高，P/N偏小，是否可以每孔OD減去顯色液對(duì)照的值?
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間接ELISA做了棋盤(pán)法篩選條件，最佳抗原和一抗?jié)舛认玛?yáng)性血清值1.0，陰性血清值0.14。我用的TMB顯色，雙波長(zhǎng)測(cè)定，空氣空白OD均值0.02�？諝饪瞻卓撞患涌乖�、抗體，只加TMB顯色液，TMB OD均值0.12。 目前我的最佳P/N值在6.0，我認(rèn)為偏低，隔壁師兄其他實(shí)驗(yàn)陽(yáng)性1.0，陰性都在0.1以下，P/N約12。我認(rèn)為我的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明封閉、抗體濃度、洗滌問(wèn)題都不大，關(guān)鍵是TMB質(zhì)量有問(wèn)題，TMB顯色液空白本底過(guò)高，影響我的P/N. 問(wèn)題：我的TMB空白OD值正常嗎？各位有經(jīng)驗(yàn)的前輩TMB空白多少？ 我可以用我的陰陽(yáng)性血清OD扣除TMB空白OD再分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果嗎？ 怎樣才能減小TMB空白的值？避光？重配？買(mǎi)現(xiàn)成的TMB？ 另：比最佳濃度更高的抗原稀釋度上，陽(yáng)性血清OD2.6，陰性0.65，是否是顯色時(shí)間太長(zhǎng)，我應(yīng)該在做Chessboard棋盤(pán)的時(shí)候把這一排抗原濃度提前終止？（不同濃度使用不同TMB顯色時(shí)間）如果看到抗原梯度上陽(yáng)性孔的值都在1.0左右，論文審稿人會(huì)有什么意見(jiàn)呢？ 另：如有詳盡專(zhuān)業(yè)的解釋?zhuān)蠹叶己迷u(píng)的，另贈(zèng)5金幣，寫(xiě)技術(shù)貼不容易  [ Last edited by wizardfan on 2012-8-24 at 05:36 ] |
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TMB空白值0.12算正常吧，不是很高，第一點(diǎn)就0.06左右，但是一般都是要扣本底的啊。 關(guān)于顯色時(shí)間，就看你的值在那段是最佳的了，都是可以調(diào)整的啊，我們一般是620nm讀值在0.6-0.7左右終止，終止完大概1.5-1.8之間吧。 還有，TMB是可以稀釋的，呵呵，你可以試下稀釋后上板，及時(shí)顯色時(shí)間會(huì)延長(zhǎng)。 |
4樓2012-08-18 21:43:15
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