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loop00木蟲 (小有名氣)
阿凡達
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[求助]
ELISA 顯色液空白OD偏高，P/N偏小，是否可以每孔OD減去顯色液對照的值?
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間接ELISA做了棋盤法篩選條件，最佳抗原和一抗?jié)舛认玛栃匝逯?.0，陰性血清值0.14。我用的TMB顯色，雙波長測定，空氣空白OD均值0.02。空氣空白孔不加抗原、抗體，只加TMB顯色液，TMB OD均值0.12。 目前我的最佳P/N值在6.0，我認為偏低，隔壁師兄其他實驗陽性1.0，陰性都在0.1以下，P/N約12。我認為我的實驗結果表明封閉、抗體濃度、洗滌問題都不大，關鍵是TMB質量有問題，TMB顯色液空白本底過高，影響我的P/N. 問題：我的TMB空白OD值正常嗎？各位有經驗的前輩TMB空白多少？ 我可以用我的陰陽性血清OD扣除TMB空白OD再分析實驗結果嗎？ 怎樣才能減小TMB空白的值？避光？重配？買現(xiàn)成的TMB？ 另：比最佳濃度更高的抗原稀釋度上，陽性血清OD2.6，陰性0.65，是否是顯色時間太長，我應該在做Chessboard棋盤的時候把這一排抗原濃度提前終止？（不同濃度使用不同TMB顯色時間）如果看到抗原梯度上陽性孔的值都在1.0左右，論文審稿人會有什么意見呢？ 另：如有詳盡專業(yè)的解釋，大家都好評的，另贈5金幣，寫技術貼不容易  [ Last edited by wizardfan on 2012-8-24 at 05:36 ] |
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TMB空白值0.12算正常吧，不是很高，第一點就0.06左右，但是一般都是要扣本底的啊。 關于顯色時間，就看你的值在那段是最佳的了，都是可以調整的啊，我們一般是620nm讀值在0.6-0.7左右終止，終止完大概1.5-1.8之間吧。 還有，TMB是可以稀釋的，呵呵，你可以試下稀釋后上板，及時顯色時間會延長。 |
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