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[求助]
從瓊脂糖凝膠中回收DNA
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| PCR擴增以后進行2%瓊脂糖凝膠，切下340bp左右的目的片段后，如何回收DNA，希望有經(jīng)驗的蟲子給點具體的建議 |
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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幾種PCR 產(chǎn)物回收的詳方法和步驟 1) 普通膠回收 如果要膠回收，最好還是用試劑盒，方便，回收率也略高，實在要手工回收，可以切膠后加入3倍體積TE，水浴熔化后，酚、酚／氯仿抽提干凈，乙醇沉淀即可。另外好像還有冷凍法，沒作過，不是很清楚。 2) 從低熔點凝膠回收DNA 純化DNA片段 加與凝膠體積相等的TE（10mmol/l Tris-HCl pH8.0，0.1mmol/l EDTA），置65℃水浴5分鐘保溫，使凝膠完全溶解。待放至室溫，加等量酚（TE飽和，TE封在上層，取下層酚），輕輕混勻（不用混勻），12000rpm，3分鐘離心。反復(fù)1-2次。取上層液，加0.1體積3mol/L醋酸鈉（pH5.2）和2.5倍體積無水乙醇，進行乙醇沉淀。將純化的DNA加適量TE溶解，測定含量，備用（可用于目的基因結(jié)構(gòu)分析，探針制備等）。 3) 擴增特異性好的PCR回收 如果PCR擴增特異性好，只是簡單的PCR產(chǎn)物純化回收，可以在PCR產(chǎn)物中加入50ug／ml 的蛋白酶K，37度1h，酚／氯仿抽提一次，氯仿抽提一次，上清加入0.1體積的醋酸鈉，2.5體積的無水乙醇沉淀回收。 |
14樓2012-08-18 19:37:47
小qiang
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2樓2012-08-17 16:40:37
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用回收試劑盒就可以回收DNA 
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10樓2012-08-18 10:22:05
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