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qiaolinkun銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
菌種鑒定的問題
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| 本人剛剛開始做微生物菌種鑒定，把細(xì)菌總DNA提取出來后PCR 膠回收 獲得純16SDNA 可以直接測序么？為什么還要轉(zhuǎn)到感受態(tài)細(xì)胞（一口愛DH5α）里去篩選陽性菌呢？兩者測序結(jié)果會有多大差異？ |
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4樓2012-08-19 23:21:04
雨傘
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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zhang8826857: 金幣+1, MicEPI+1, lz給了這么高的評價，授予epi一枚 2012-08-22 16:03:09
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| 直接和你說吧，測序的原理你自己要弄清楚！找書看吧，測序公司拿回去也是和你做PCR的原理差不多。PCR產(chǎn)物測序易出現(xiàn)雙峰，所以你的試劑和PCR操作一定要過關(guān)，有雜菌污染測序結(jié)果可能就會出問題了，但是，操作過關(guān)看一個大概結(jié)果也可以將PCR產(chǎn)物直接測序，只是測得的前幾十個堿基是不準(zhǔn)確的。而做一個克隆就不會出現(xiàn)這些問題，一個載體一般連一個PCR片段，一個轉(zhuǎn)化子只能含有一個這樣含目的片段的載體（同種質(zhì)粒不相容），挑單菌落測序應(yīng)該測的單一結(jié)果的，而且這樣測序你用的是載體上的引物測序，而非16S引物，這樣得到了完整而準(zhǔn)確的16S序列。 |
6樓2012-08-20 00:44:57
yesucao
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2樓2012-08-19 20:00:48
qiaolinkun
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3樓2012-08-19 20:50:33
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yesucao
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9樓2012-08-21 22:02:37
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