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banlangeny銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
求助 磁珠接DNA以及其吸附問題！�。。。。。。�！
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在修飾了-COOH的磁珠上連接NH3修飾的DNA（29堿基），再將羅丹明修飾的DNA（14個(gè)堿基）雜交在上述DNA上。 具體操作為：取100 ul 磁珠，用200 ul 的咪唑鹽酸（ph=6.8）清洗三次，磁分離后，用咪唑鹽酸還原為100ul體系，再加入400 ul EDC(0.1M，現(xiàn)配現(xiàn)用）超聲1min后活化1h，磁分離后加入200 ul TAE(ph=8.0) buffer。取10 ul 0.00001M 用NH3修飾的DNA加入10 ul 咪唑鹽酸（ph=6.8）混合30min后加入到用TAE稀釋的磁珠中，在搖床中震蕩下，37度，反應(yīng)12h。磁分離，用200 ul PBS(ph=9.0)的清洗三次，加入200 ul TAE(ph=8.0) buffer，再加入10 ul 0.00001M 羅丹明修飾的DNA，在37度下雜交2 h。磁分離，用200 ul PBS(ph=9.0)的清洗7次，將最后四次清洗液混合在分光光度計(jì)上測(cè)熒光，磁珠用TAE稀釋后去激光共聚焦上拍照。 結(jié)果：1，在激光共聚焦上拍的照片顯示，有的時(shí)候接的非常均勻，熒光可以在單個(gè)磁珠上顯示，但多數(shù)的實(shí)驗(yàn)熒光是在磁珠聚集團(tuán)的上面顯示，單個(gè)磁珠不能顯示熒光 2，最后四次的混合液測(cè)熒光發(fā)現(xiàn)還是有信號(hào)，說明前三次清洗不干凈 問題：1，如何清洗磁珠，使磁珠對(duì)DNA的吸附降到最低。 2，磁珠接DNA,如何使DNA能夠盡量多的并且均勻的連接在磁珠上。 |
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