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passion120鐵蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
求助：過(guò)氧化物酶提取及活性測(cè)定，顏色、吸光度都無(wú)變化
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本人最近在做椰肉中的過(guò)氧化物酶的提取及活性測(cè)定方法如下： 5g椰肉加35ml緩沖液研磨，4℃今天10min，13000g離心30分鐘，取上清液。其中緩沖液分別做了一下幾種: ph8.8 50mM tris-hcl、ph7.8 0.1mM磷酸緩沖液、ph7.0 0.1mM 磷酸緩沖液。 活性測(cè)定如下： 3.0mL 25mM愈創(chuàng)木酚（0.05m ph7.8 或7.0 配制，或者0.05m tris-hcl ph5.5），200ul（400,或500或1000）酶液，200ul 0.5M 過(guò)氧化氫，470nm，30℃測(cè)定。 按照這方法提取測(cè)定，470 吸光值始終不變，有氣泡生成但無(wú)茶褐色物質(zhì)生成，不知道什么原因啊，特想各位大神求助，新手剛注冊(cè)，1個(gè)金幣意思意思哈 另外我嘗試了用—20℃丙酮做丙酮粉后磷酸緩沖液溶解測(cè)定，依舊測(cè)不出來(lái)，但英文文獻(xiàn)里邊采用ph 8.8 tris-hcl提取，ph5.5測(cè)定，結(jié)果活性還不錯(cuò)的 |
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