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sgn311銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
關(guān)于甲羥戊酸途徑中一個關(guān)鍵酶酶活測定方法，求指導(dǎo)
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以前沒有測過酶活，這次做的實驗中要測一個酶活。但是查閱的文獻有地方看不明白，所以請教大家。原文如下：The assay of MDD was based on that previously described with minor modification。The following components were incubated in a 1.0-ml cuvette: 0.1 M Tris buffer, pH 7.5, 0.16 mM NADH, 5 mM MgCl2, 4 mM ATP, 10 μg MDD, 0.5 mM phosphoenol pyruvate, 29 units of pyruvate kinase, and 37 units of lactate dehydrogenase. The measurement of enzyme activity was carried out at 25 °C on a Hitachi U-2001 UV/Vis dual beam spectrometer. The background rate of NADH oxidation was measured for 2 min, and then 36 μM mevalonate 5-diphosphate was added. The reaction was monitored for another 2 min. One unit of enzyme activity was defined as the amount of enzyme required to convert 1 μmol of mevalonate 5-diphosphate to product per minute. Determination of the KM and the Vmax was performed using the same assay buffer with one substrate concentration fixed while varying another substrate concentration. 文中的反應(yīng)體系中還要加酶，而且是制定酶活的酶，這個該怎么做呢。謝謝大家 |
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