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[求助]
5'race 求助，萬分感激~~~
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| 各位大俠好，最近在做5‘race。用的是cloneth的SmartRace kit，引物Tm值在70度附近，操作的步驟完全按照kit的進(jìn)行：兩次PCR過程中，第一次用touchdowm PCR，后產(chǎn)物稀釋50倍，作nest PCR，68度退火，72延伸3min，25個cycles；看到有清晰的條帶，大小跟我想要的size差不多，回收做連接測序，結(jié)果是26S ribosomal RNA gene的部分序列，重新提取RNA并進(jìn)行檢測，cDNA也做了檢測，均沒有問題。然后做了race，結(jié)果得到size差不多的條帶，最后測序結(jié)果也是一樣。奇怪的是所得到的序列中也找不到我做pcr的引物，請問問題出在哪里了？我需要怎樣改進(jìn)我的實驗條件？因為是第一次做race，有很多都不懂，請大家指教。謝謝~ |
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yananhl
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5樓2012-09-18 16:45:50
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yananhl
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3樓2012-09-18 10:35:03
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