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sjjsy7銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
膠回收老收不到，請教高手
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| 本人新手，最近在構(gòu)載體，剛把基因都P出來，可酶切后老是收不到片段，各種方式都試過了還不行，現(xiàn)想問一下做過的前輩，做膠回收要注意些什么？還有就是哪個公司的試劑盒回收效率高點，我用的是天跟的，不過都放2年多了，馬上要中期考核了，很著急，請各位高手幫忙！��！ |
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【答案】應(yīng)助回帖
1949stone: 回帖置頂 2012-09-17 17:19:48
1949stone: MolEPI+1, very good 2012-09-17 17:20:12
1949stone: MolEPI+1, very good 2012-09-17 17:20:12
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個人見解，膠回收重要點： 電泳要讓目的條帶與雜帶分開，以防污染；電泳液最好換新的。切膠要完全。 溶膠58度，10分鐘，期間混勻3次，保證充分融化。 冰浴約5分鐘（此步非常重要，一般試劑盒中都說是冷卻至室溫，但是溫度越低與柱子結(jié)合效率越高。不管是質(zhì)粒提取試劑盒還是膠回收，包括后面的洗脫EB預(yù)熱是一個道理，溫度高柱子結(jié)合效率低，溫度低結(jié)合效率高。所以試劑盒的保存條件是不高于35度，高溫保質(zhì)期短） 冰浴后上柱離心按步驟來。空甩后注意讓乙醇揮發(fā)完全，直接用鼻子聞下即可，看是否有乙醇味道。 加洗脫液EB，60度放置2-3分鐘后高速離心1次即可。 |
20樓2012-09-17 16:27:40
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10樓2012-09-02 16:42:03
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