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tianjietian木蟲 (小有名氣)
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求助：雙歧桿菌的培養(yǎng)方法！
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| 實(shí)驗(yàn)室要擴(kuò)項(xiàng)，做雙歧桿菌的計(jì)數(shù)，以前沒(méi)有做過(guò)類似的實(shí)驗(yàn)，只知道雙歧桿菌是專性厭氧菌，想請(qǐng)教各位大拿，這個(gè)菌種的培養(yǎng)條件是什么?最好是從菌種傳代的培養(yǎng)基溫度等等條件到計(jì)數(shù)觀察菌落特征都能詳細(xì)提供一下！謝謝！著急��！ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
tianjietian: 金幣+20, 非常感謝！ 2012-09-06 21:53:06
zhang8826857: 金幣+5, MicEPI+1, good，epi一枚。 2012-09-09 23:00:35
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zhang8826857: 金幣+5, MicEPI+1, good，epi一枚。 2012-09-09 23:00:35
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我們養(yǎng)過(guò)，給你作參考：雙歧桿菌，培養(yǎng)基PTYG，TPY，MRS等。37度培養(yǎng)。要?jiǎng)?chuàng)造厭氧環(huán)境才能培養(yǎng)，我們采用厭氧箱法。液體培養(yǎng)條件要求稍微低一點(diǎn)，可用圓底燒瓶（口比較細(xì)，容量還大），塞上棉塞在普通培養(yǎng)箱中也可以生長(zhǎng)，但平板幾乎不行，可以試試雙層平板法，如果不長(zhǎng)，那就要必須創(chuàng)造嚴(yán)格的厭氧環(huán)境了。 計(jì)數(shù)時(shí)常采用傾注平板法，具體實(shí)驗(yàn)方法在實(shí)驗(yàn)書上都有。菌體會(huì)在培養(yǎng)基表面和中間都生長(zhǎng)，長(zhǎng)在表面和底部的是圓形，長(zhǎng)在培養(yǎng)基中間的是菱形。 雙歧桿菌保藏可采用甘油管法，配60%的甘油溶液，與發(fā)酵液1:3混合，用EP管保藏于-80度冰箱即可，雙歧桿菌的平板在4度下死亡較快，兩天以后就夠嗆能接出來(lái)了。 |
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小崔9333
2樓2012-09-03 16:38:12
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4樓2012-09-05 17:26:19
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6樓2012-09-07 13:28:34
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這個(gè)現(xiàn)象就有點(diǎn)奇怪了，是不是密封性不好了，斜面都長(zhǎng)了。雙層平板你可以試一試看，在涂布好的平板上倒一層固體培養(yǎng)基，不要太燙，也要放在厭氧環(huán)境中培養(yǎng)。涂布的濃度別太稀了。（也可以直接用傾注法，等培養(yǎng)基凝后，再倒一層。） 還有，斜面的培養(yǎng)基也有莫匹羅星鋰鹽嗎？我隨便搜了一下《莫匹羅星鋰鹽改良MRS檢測(cè)雙歧桿菌的應(yīng)用研究》中講到，并不是所有雙歧桿菌都耐這個(gè)鹽，而且鹽的濃度也有很大。 我覺(jué)得莫匹羅星..可以不加，反正就這一種菌，不用抑制其他菌 培養(yǎng)基，方法，一批實(shí)驗(yàn)多試幾種吧，現(xiàn)在不是挺著急的嘛。 接種時(shí)要選擇新鮮活躍的菌液或者剛長(zhǎng)好的新鮮的單菌落 |
8樓2012-09-10 10:58:46
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9樓2012-09-10 11:00:59
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12樓2013-07-11 13:55:09
tianjietian
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謝謝指導(dǎo)！那么凍干菌株在復(fù)活的時(shí)候用什么培養(yǎng)基？PYG、營(yíng)養(yǎng)肉湯還是其他的？我在CICC購(gòu)買的陽(yáng)性菌株，使用說(shuō)明上用強(qiáng)化梭菌培養(yǎng)基培養(yǎng)雙歧桿菌，不知道能不能培養(yǎng)出來(lái)？還有我們實(shí)驗(yàn)室目前沒(méi)買到PYG的添加試劑（氯化紅霉素和維生素K1），只有液體培養(yǎng)基，不知道不加的話菌能否生長(zhǎng)？厭氧條件也都用了，就是平板劃線不長(zhǎng)，您說(shuō)的雙層平板法是否接完之后再鋪一層培養(yǎng)基��？昨天剛把新買到的雙歧傳了肉湯和斜面，36度厭氧培養(yǎng)了，不知道結(jié)果如何，還請(qǐng)繼續(xù)指教��！ |
3樓2012-09-04 12:12:55
tianjietian
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5樓2012-09-06 21:52:48
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您好！還有問(wèn)題想要請(qǐng)教您。今天看了培養(yǎng)的雙歧桿菌，在莫匹羅星鋰鹽MRS培養(yǎng)基中涂布的，一個(gè)菌也沒(méi)有長(zhǎng)，不知道為什么？斜面都長(zhǎng)了，菌懸液也渾濁了，怎么平板不長(zhǎng)啊？是不是BBL上上好一些？還有是不是涂布的方法不好？應(yīng)該想您說(shuō)的做雙層更能創(chuàng)造厭氧環(huán)境啊？很著急這個(gè)菌從來(lái)沒(méi)做過(guò)，真是不太好做啊。要是做不出來(lái)就通不過(guò)擴(kuò)項(xiàng)了。請(qǐng)指教！ |
7樓2012-09-09 21:49:15
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