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Lynn和Mia金蟲 (小有名氣)
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[求助]
求助求助~~設(shè)計(jì)引物有多少分類？分別適用于什么情況？
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| 各位實(shí)驗(yàn)達(dá)人，我最近在做real time PCR，先提取總mRNA，再反轉(zhuǎn)錄成單鏈cDNA，最后做熒光定量PCR，最近設(shè)計(jì)引物的時(shí)候發(fā)現(xiàn)有人說的什么設(shè)計(jì)跨內(nèi)含子的引物，我就不太明白了，希望各位達(dá)人給予解惑，什么是跨內(nèi)含子的引物？為什么要設(shè)計(jì)這樣的引物？引物設(shè)計(jì)有哪些分類？我應(yīng)該設(shè)計(jì)哪一種引物呢？非常困惑+迷茫ing~~~望指教~~~非常感謝O(∩_∩)O哈！ |
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Lynn和Mia
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Lynn和Mia: 金幣+10, ★★★很有幫助 2012-11-15 09:49:41
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個(gè)人認(rèn)為，跨內(nèi)含子引物，就是說是說上游引物或者下游引物中的一條同時(shí)落在兩個(gè)外顯子上，不含有內(nèi)含子序列，因?yàn)閙RNA不含有內(nèi)含子，這樣設(shè)計(jì)的引物只能檢測(cè)出mRNA，而不能檢測(cè)出基因組，對(duì)mRNA的定量就相對(duì)準(zhǔn)確。所以設(shè)計(jì)引物的時(shí)候就要限定一下上下游引物的位置了。 至于引物種類，這個(gè)問題我不怎么明白你要問的是什么，熒光定量的引物設(shè)計(jì)原則很多地方都可以搜到的。祝你好運(yùn)吧 |
4樓2012-11-14 13:34:12
Lynn和Mia
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5樓2012-11-15 09:48:47
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