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cnb1987

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最近在設(shè)計(jì)引物，關(guān)于啟動(dòng)子區(qū)SNP檢測(cè)的引物，設(shè)計(jì)錯(cuò)配堿基酶切引物，發(fā)現(xiàn)不好設(shè)計(jì)，設(shè)計(jì)出來(lái)的引物在3‘端需要三個(gè)錯(cuò)配堿基，請(qǐng)問(wèn)一下有三個(gè)錯(cuò)配堿基的引物，能將目的片段克隆出來(lái)么？

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1樓 2012-09-04 21:38:29

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【答案】應(yīng)助回帖

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cnb1987: 金幣+2, ★★★很有幫助, 嗯，希望對(duì)我又幫助 2012-09-05 11:01:55

無(wú)所謂的，我經(jīng)常酶切位點(diǎn)加保護(hù)堿基有六個(gè)錯(cuò)配的，如果你覺(jué)得不保險(xiǎn)可以把引物設(shè)計(jì)長(zhǎng)點(diǎn)

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2樓2012-09-05 07:57:15

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引用回帖:

2樓: Originally posted by lecou at 2012-09-05 07:57:15
無(wú)所謂的，我經(jīng)常酶切位點(diǎn)加保護(hù)堿基有六個(gè)錯(cuò)配的，如果你覺(jué)得不保險(xiǎn)可以把引物設(shè)計(jì)長(zhǎng)點(diǎn)

呵呵，是么？我的引物是在3‘端錯(cuò)配的。這樣也沒(méi)關(guān)系么？

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3樓2012-09-05 11:01:19

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應(yīng)該也沒(méi)事，不影響下一個(gè)堿基的配對(duì)吧，只是提供了一個(gè)羥基，只要結(jié)合到合適的位置就行了，平時(shí)pcr的時(shí)候也會(huì)有的地方出現(xiàn)錯(cuò)誤的，但是不覺(jué)得有影響下一步的合成

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4樓2012-09-05 14:05:49

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引用回帖:

4樓: Originally posted by lecou at 2012-09-05 14:05:49
應(yīng)該也沒(méi)事，不影響下一個(gè)堿基的配對(duì)吧，只是提供了一個(gè)羥基，只要結(jié)合到合適的位置就行了，平時(shí)pcr的時(shí)候也會(huì)有的地方出現(xiàn)錯(cuò)誤的，但是不覺(jué)得有影響下一步的合成

你好，我上次詢問(wèn)你的問(wèn)題，我現(xiàn)在引物合成回來(lái)了，上次你可以搞錯(cuò)了，我要做的是RFLP，來(lái)檢測(cè)SNP，我的錯(cuò)配堿基是在3'端，而加酶切位點(diǎn)和保護(hù)堿基是在5‘端的！現(xiàn)在引物回來(lái)了，擴(kuò)不出來(lái)，你能給點(diǎn)什么建議么？

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5樓2012-10-06 15:08:13

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【答案】應(yīng)助回帖

我感覺(jué)3‘的三個(gè)錯(cuò)配應(yīng)該不會(huì)有很大問(wèn)題，你可以另合成一組3’沒(méi)有錯(cuò)配的對(duì)照一下，驗(yàn)證是不是pcr條件或者是基因組之類的原因，如果對(duì)照出來(lái)了，才能說(shuō)明真的有可能是3‘錯(cuò)配的原因。我不做AFLP所以我就不太了解了，不過(guò)我覺(jué)得3’端的那三個(gè)是來(lái)在不同的DNA位置配對(duì)吧，我也記不清楚了，祝你實(shí)驗(yàn)順利！

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6樓2012-10-08 15:49:20

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