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zmj521good鐵桿木蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
為什么沒(méi)有轉(zhuǎn)化成功的菌依然可以在Amp+培養(yǎng)基上長(zhǎng)呢?到底為什么呢? 已有10人參與
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| 我將連接好的T載體轉(zhuǎn)化感受態(tài)DH5α,之后用載體上的通用引物擴(kuò)增,總是無(wú)帶,后來(lái)提取質(zhì)粒,發(fā)現(xiàn)竟沒(méi)有質(zhì)粒,所以說(shuō)明轉(zhuǎn)化失敗,但是轉(zhuǎn)化失敗菌為什么可以在含有抗生素的培養(yǎng)基上長(zhǎng)呢?在這里請(qǐng)教各位高手了。。 |

木蟲(chóng) (初入文壇)

金蟲(chóng) (小有名氣)
| 通常有兩種可能,一種是Amp失效,如上所說(shuō),另外一種也比較常見(jiàn),就是感受態(tài)細(xì)胞污染。我們實(shí)驗(yàn)室最近就是這樣的,明明挑單克隆做感受態(tài),誰(shuí)知道居然就有Amp抗性菌的污染,直接把沒(méi)轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞涂在Amp板子上一樣長(zhǎng)。后來(lái)跟師兄師姐們請(qǐng)教,原來(lái)是正,F(xiàn)象,大家都遇到過(guò)。避免的方法就是保存好你的Dh5a的菌種,不要從感受態(tài)劃板子再做感受態(tài)。如果是Amp失效,換新的Amp,或者從其他實(shí)驗(yàn)室借一個(gè)板子試試。有的時(shí)候Amp容易失效,搖菌時(shí)間過(guò)長(zhǎng)也會(huì)導(dǎo)致提不出質(zhì)粒。如果是感受態(tài)污染,就重新做吧 |

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