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zmj521good鐵桿木蟲 (小有名氣)
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[交流]
為什么沒(méi)有轉(zhuǎn)化成功的菌依然可以在Amp+培養(yǎng)基上長(zhǎng)呢？到底為什么呢？ 已有10人參與
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| 我將連接好的T載體轉(zhuǎn)化感受態(tài)DH5α，之后用載體上的通用引物擴(kuò)增，總是無(wú)帶，后來(lái)提取質(zhì)粒，發(fā)現(xiàn)竟沒(méi)有質(zhì)粒，所以說(shuō)明轉(zhuǎn)化失敗，但是轉(zhuǎn)化失敗菌為什么可以在含有抗生素的培養(yǎng)基上長(zhǎng)呢？在這里請(qǐng)教各位高手了�。�！ |
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2012-09-05 14:13:16
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小丹木木: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2012-09-05 14:13:16
| 通常有兩種可能，一種是Amp失效，如上所說(shuō)，另外一種也比較常見，就是感受態(tài)細(xì)胞污染。我們實(shí)驗(yàn)室最近就是這樣的，明明挑單克隆做感受態(tài)，誰(shuí)知道居然就有Amp抗性菌的污染，直接把沒(méi)轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞涂在Amp板子上一樣長(zhǎng)。后來(lái)跟師兄師姐們請(qǐng)教，原來(lái)是正�，F(xiàn)象，大家都遇到過(guò)。避免的方法就是保存好你的Dh5a的菌種，不要從感受態(tài)劃板子再做感受態(tài)。如果是Amp失效，換新的Amp，或者從其他實(shí)驗(yàn)室借一個(gè)板子試試。有的時(shí)候Amp容易失效，搖菌時(shí)間過(guò)長(zhǎng)也會(huì)導(dǎo)致提不出質(zhì)粒。如果是感受態(tài)污染，就重新做吧 |
4樓2012-09-05 09:22:38
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2樓2012-09-04 21:56:53
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10樓2012-09-06 12:34:03
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