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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 提RNA提傷了
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[交流]
提RNA提傷了
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提RNA都快成提RNA工人了，提的次數(shù)那是個多啊，可是都要提提傷了，為什么老降解，怎么提都降解，到底是怎么回事，如果說夏天是因為天氣熱，這個天氣怎么也會降解，是個什么情況？我把洗滌RNA的乙醇第一次配成70%，第二次配成73%左右了，不知道腦子怎么了，可能是抽了，老是配錯。不知道這些有沒有影響。這是我這兩天提的RNA圖，請大家看看我能不能往下做RACE，我實在沒辦法了，不知道 到底是個什么原因。今天測了下第一次提的OD值，兩個OD260/280和濃度分別是：1.99，785.7ng/ul;2.02,1314ng/ul.我覺得值還是蠻好的。我檢測RNA的時候上樣量是2ul。用的是普通的檢測DNA的器皿，不過新?lián)Q的電泳緩沖液。 2012-9-5-4.jpg 2012-9-6-2.jpg [ Last edited by yananhl on 2012-9-7 at 10:44 ] |
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小丹木木: 金幣+3, 鼓勵交流經(jīng)驗 2012-09-06 13:55:59
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小丹木木: 金幣+3, 鼓勵交流經(jīng)驗 2012-09-06 13:55:59
| 研究生期間也提了幾百個，但是是植物RNA。當時用的管以及槍頭都是Axygen的RNase free產(chǎn)品，試劑為TaKaRa的RNAiso，其余儀器以及試劑都是自己處理的。提取這么多次，絕大部分質(zhì)量不錯（電泳結(jié)合分光光度計測定OD260/OD280），個人感覺環(huán)境和操作都很重要。提RNA最好有個獨立的實驗室，是在沒條件，最好有塊獨立的RNA操作區(qū)；在操作上，操作者的手套口罩等以及實驗每步都要考慮如何操作能降低降解的幾率。 |
12樓2012-09-05 20:40:25
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yananhl: 金幣+1, 謝謝 2012-09-06 09:56:31
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵交流經(jīng)驗 2012-09-06 13:56:14
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
yananhl: 金幣+1, 謝謝 2012-09-06 09:56:31
小丹木木: 金幣+3, 鼓勵交流經(jīng)驗 2012-09-06 13:56:14
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之前提過好多次RNA 人的肝癌組織的，每次的質(zhì)量都挺好的，說說我的方法，首先要確保所用的移液器和槍頭是RNase-free的 最好買進口的，提組織的時候研磨用的研缽和研缽棒要用DEPC水浸泡24h然后高壓滅菌，最后烘干，烘干的過程中要用錫箔紙包封好。在研磨前最好把研缽和缽棒放在冰箱中預冷。磨組織的時候要在冰上，并且研缽中要加入trizol和液氮，磨的時候要快。另外就是要戴好手套和口罩。還要注意不要讓大家在你身邊來回走動，在實驗過程中盡量不要對著試驗臺說話，提RNA的試驗臺要遠離提質(zhì)粒的試驗臺。我覺得這些都注意了應該就不會有什么問題了，希望對LZ會有幫助。 [ Last edited by angel_yy on 2012-9-5 at 20:56 ] |
13樓2012-09-05 20:54:46
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