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wujibifan新蟲 (小有名氣)
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[求助]
求助-基因的突變文庫相關(guān)問題 已有1人參與
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給位大俠,小弟最近在構(gòu)建一個(gè)基因的突變文庫,具體流程是:先克隆該基因,連到一個(gè)穿梭載體上,測序確定該基因后,進(jìn)行易錯(cuò)PCR,來得到該基因的突變體,然后和之前同樣的載體連接,轉(zhuǎn)化大腸桿菌,進(jìn)而構(gòu)建突變文庫。 現(xiàn)遇到的問題:轉(zhuǎn)化率太低,每次轉(zhuǎn)化就長幾個(gè)菌,導(dǎo)致文庫的容量不夠,沒有代筆性。 求助:請各位大俠幫幫我,我該在那些地方改進(jìn)呢?我已驗(yàn)證酶切效果很好,轉(zhuǎn)化過程中設(shè)置了陽性對照,轉(zhuǎn)化也很好,估計(jì)是連接過程出問題?目的片段與載體的摩爾比很重要嗎?用哪個(gè)公司的連接酶效果會(huì)好些?我用過TAKARA,Promega的,效果都差不多。緩沖液失效了? [ Last edited by 1949stone on 2012-9-13 at 07:43 ] |
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新蟲 (小有名氣)
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