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zhouxw1987鐵蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
用DNaseⅠ處理RNA中混有的DNA后續(xù)操作如何進(jìn)行？ 已有1人參與
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用Trizol抽提水稻葉片RNA，電泳檢測(cè)后發(fā)現(xiàn)有很多的DNA污染，打算用DNaseⅠ進(jìn)行處理除去殘留的DNA。DNaseⅠ說(shuō)明書(shū)上說(shuō)的是處理完后可以用RNA純化試劑盒進(jìn)行純化（這個(gè)試劑盒實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有，所以不用該方法），或者加入一定量的EDTA終止反應(yīng)并65℃加熱10min，但這種方法會(huì)有殘留有各種離子。現(xiàn)在我想問(wèn)的是：這個(gè)EDTA是如何配制才能保證不含有RNase，同時(shí)殘留的各種離子是否會(huì)對(duì)后續(xù)的反轉(zhuǎn)錄和RT-PCR有影響？？或者可否不用EDTA，而直接將DNaseⅠ處理的RNA溶液80℃處理10min以便去除DNaseⅠ（網(wǎng)上顯示該酶在80攝氏度處理10分鐘后將永久滅活）。 請(qǐng)問(wèn)大家是如何處理RNA中混有的DNA呢？？謝謝各位了····· |
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zhouxw1987
鐵蟲(chóng) (初入文壇)
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5樓2012-09-16 15:29:28
gwd0312
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2樓2012-09-16 11:17:06
atlanticwi
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【答案】應(yīng)助回帖
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嗯................. 是這樣的，用EDTA終止法并加熱，我們實(shí)驗(yàn)室一般不用，因?yàn)槲覀冋J(rèn)為若是有一點(diǎn)殘留RNAse的話，65度下10min是非常危險(xiǎn)的。所以一般滅活法采用酚氯仿抽提兩次，然后醇低溫沉淀回收RNA。具體使用方法請(qǐng)移步至： http://www.takara.com.cn/explain/B/D2270A.pdf |
3樓2012-09-16 12:21:40
zhouxw1987
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4樓2012-09-16 15:28:40
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