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zhouxw1987鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
用DNaseⅠ處理RNA中混有的DNA后續(xù)操作如何進行？ 已有1人參與
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用Trizol抽提水稻葉片RNA，電泳檢測后發(fā)現(xiàn)有很多的DNA污染，打算用DNaseⅠ進行處理除去殘留的DNA。DNaseⅠ說明書上說的是處理完后可以用RNA純化試劑盒進行純化（這個試劑盒實驗室沒有，所以不用該方法），或者加入一定量的EDTA終止反應(yīng)并65℃加熱10min，但這種方法會有殘留有各種離子。現(xiàn)在我想問的是：這個EDTA是如何配制才能保證不含有RNase，同時殘留的各種離子是否會對后續(xù)的反轉(zhuǎn)錄和RT-PCR有影響？？或者可否不用EDTA，而直接將DNaseⅠ處理的RNA溶液80℃處理10min以便去除DNaseⅠ（網(wǎng)上顯示該酶在80攝氏度處理10分鐘后將永久滅活）。 請問大家是如何處理RNA中混有的DNA呢？？謝謝各位了····· |
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272401213
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8樓2012-09-17 07:38:15
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2樓2012-09-16 11:17:06
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嗯................. 是這樣的，用EDTA終止法并加熱，我們實驗室一般不用，因為我們認為若是有一點殘留RNAse的話，65度下10min是非常危險的。所以一般滅活法采用酚氯仿抽提兩次，然后醇低溫沉淀回收RNA。具體使用方法請移步至： http://www.takara.com.cn/explain/B/D2270A.pdf |
3樓2012-09-16 12:21:40
zhouxw1987
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4樓2012-09-16 15:28:40
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