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集氣瓶鐵蟲 (小有名氣)
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[求助]
關(guān)于畢赤酵母菌懸液的誘變！��！
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現(xiàn)在我們?cè)谧龀菏覝氐入x子體對(duì)畢赤酵母的致死率實(shí)驗(yàn)，我們是取的160rpm搖床培養(yǎng)24h的后的菌液實(shí)驗(yàn)，等離子體處理完之后放入28℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)72h，結(jié)果只有少部分平板長出菌落（0s對(duì)照組也是長出少量），我們分析的原因是：1、搖床培養(yǎng)時(shí)間過短；2、冷藏的畢赤酵母變紅色，可能菌落老化；3、畢赤酵母不叫容易沉淀，梯度稀釋過程中稀釋液上部菌數(shù)較少。不知道有沒有做過畢赤酵母的時(shí)間，到底是什么原因呢？？？ |
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
zhang8826857: 金幣+3, MicEPI+1, good 2012-09-22 16:13:50
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zhang8826857: 金幣+3, MicEPI+1, good 2012-09-22 16:13:50
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對(duì)于你的情況，說下個(gè)人見解： 畢赤酵母的培養(yǎng)過程中出現(xiàn)絮凝情況是比較常見的，在遇到這種情況時(shí)，可以漩渦劇烈震蕩混勻分散，然后進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn)。 冷藏的畢赤酵母接種活化，在160rpm培養(yǎng)24h，時(shí)間不算長，培養(yǎng)到對(duì)數(shù)期約需36h左右，這個(gè)時(shí)候菌的活力最好，適宜后續(xù)試驗(yàn)。 畢赤酵母的平板培養(yǎng)，一般在30度溫箱。直接挑菌劃線，平板大約培養(yǎng)24h足矣。菌液涂板一般36-48h；轉(zhuǎn)化涂板無抗性板約需36h-48h；涂抗性板約48h（-60h）。重要基因敲除菌約需培養(yǎng)72-96h。你培養(yǎng)72h后菌落數(shù)量仍比較少應(yīng)該不會(huì)再長了。 冷藏的畢赤酵母變紅色，在我的實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)過一次，最后確定是染菌了。 畢赤酵母比較容易沉淀，那你再稀釋的時(shí)候應(yīng)該漩渦振蕩或移液槍混勻后再稀釋進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。 總結(jié)以上情況，個(gè)人認(rèn)為有2個(gè)原因： 一是，你的菌活化搖床培養(yǎng)時(shí)間短，菌沒有生長到穩(wěn)定期，菌的活力不夠穩(wěn)定。鑒于你的實(shí)驗(yàn)，我認(rèn)為應(yīng)該培養(yǎng)至穩(wěn)定期，并維持3-4h，確保所有的菌都已進(jìn)入穩(wěn)定期，那么你后續(xù)實(shí)驗(yàn)中菌才是完全相同的。 二是，你在去活化菌液稀釋涂板時(shí)，應(yīng)該混勻后再去菌液稀釋進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)，不應(yīng)該只取基本沉淀后的上清少量菌液進(jìn)行稀釋涂板。 僅供參考，多多交流。 |
4樓2012-09-22 11:45:43
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2樓2012-09-21 11:31:35
集氣瓶
鐵蟲 (小有名氣)
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3樓2012-09-22 09:13:29
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5樓2012-09-22 15:46:44
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