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QUENIX2321鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
連接產(chǎn)物酶切的一點(diǎn)問題
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將連接產(chǎn)物做轉(zhuǎn)化 進(jìn)行菌落PCR 將PCR鑒定陽性（跑出目的基因）的菌落 提質(zhì)粒 之后 做的質(zhì)粒PCR（空載體做驗(yàn)證）都很成功 目的基因條帶很亮 載體5000 目的基因800 之后進(jìn)行雙酶切驗(yàn)證 結(jié)果切出了二/三條帶 有約5000、4000、2000 不明白  ？是酶切 沒切干凈？ ECORI 2UL XHO1 2UL BUFFER H 4UL 模板 約1ug ddH2O up to 40ul 37℃ 過夜  20120921 |
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QUENIX2321
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2樓2012-09-22 00:42:42
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4樓2012-09-22 20:18:26
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【答案】應(yīng)助回帖
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小丹木木: 金幣+3, 歡迎回來 2012-09-24 10:23:47
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嗯................. 同意樓上童鞋方針 1. 菌落PCR一定要有NTC 2. 質(zhì)粒酶切一定要有原質(zhì)粒電泳對(duì)照 3. 錢多并且嫌麻煩就測(cè)序 給通用引物 可以測(cè)出部分載體序列的 4. 一定要確定酶的位點(diǎn)數(shù)再做 說實(shí)話 個(gè)人覺得 EcoRI和XhoI都算位點(diǎn)出現(xiàn)頻率中上的酶了 個(gè)人看法 若有說錯(cuò)請(qǐng)高手指點(diǎn)  |
6樓2012-09-23 11:31:21
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2012-09-24 10:23:57
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7樓2012-09-23 14:36:24
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8樓2012-09-24 12:07:00
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