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heshengfa木蟲 (小有名氣)
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我剛開始做原核表達(dá)，我的表達(dá)菌是BL21(DE3)，蛋白（GST標(biāo)簽）是可溶性的，目前在細(xì)菌破碎方面遇到些問題，想請教一下各位前輩。 1、我想問問大家對裂解液有什么好的建議。 2、溶菌酶溶液能在-20度保存多久。大家的工作濃度是根據(jù)菌的濕重來定嗎？ 3、cocktail是現(xiàn)配現(xiàn)用嗎，使用濃度是多少？ 4、大家裂解后還超聲嗎，工作條件是多少？ 由于是新手，問的問題有點(diǎn)多，希望各位不吝賜教，看回答情況會加金幣。最后祝大家節(jié)日快樂。謝謝 |
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2樓2012-09-29 15:58:18
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
amisking: 金幣+5, 鼓勵積極發(fā)帖幫助解答問題。 2012-09-29 18:48:38
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說點(diǎn)個(gè)人見解： 1.裂解液一般也是緩沖液的作用，在裂解細(xì)胞的同時(shí)也要保證合適的環(huán)境。個(gè)人認(rèn)為這個(gè)不是特別重要（不過也要看你的實(shí)驗(yàn)粗放程度了  ），之前用水也做過，沒有很大的不同。至于合適的裂解液，一般文獻(xiàn)中都會有涉及到，可以試試。2.對于胞內(nèi)蛋白，本人一般不用溶菌酶裂解細(xì)胞。 3.也沒有必要現(xiàn)配現(xiàn)用，一般4度保存是不會有很大問題的。主要是保證pH不能有很大變化，另外有沒有結(jié)晶或絮狀物出現(xiàn)等問題。 4.一般都是裂解液配合超聲破碎，也可以用加玻璃珠振蕩破碎。如果你只是為了檢測，可以超聲破碎也可以振蕩破碎。如果是為了后續(xù)實(shí)驗(yàn)，能夠用振蕩破碎覺得會更好。玻璃珠用的是425-600um的，一般的生物公司都有賣，有點(diǎn)貴，一支酶的價(jià)錢吧，sigma的是160元/10g。 |
3樓2012-09-29 17:24:27
heshengfa
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4樓2012-10-01 09:44:03
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5樓2012-10-01 09:44:47
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6樓2012-10-02 00:54:46
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heshengfa
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8樓2012-10-02 09:34:04
heshengfa
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