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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 生物科學 » 表達
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heshengfa木蟲 (小有名氣)
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我剛開始做原核表達，我的表達菌是BL21(DE3)，蛋白（GST標簽）是可溶性的，目前在細菌破碎方面遇到些問題，想請教一下各位前輩。 1、我想問問大家對裂解液有什么好的建議。 2、溶菌酶溶液能在-20度保存多久。大家的工作濃度是根據菌的濕重來定嗎？ 3、cocktail是現配現用嗎，使用濃度是多少？ 4、大家裂解后還超聲嗎，工作條件是多少？ 由于是新手，問的問題有點多，希望各位不吝賜教，看回答情況會加金幣。最后祝大家節(jié)日快樂。謝謝 |
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【答案】應助回帖
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說點個人見解： 1.裂解液一般也是緩沖液的作用，在裂解細胞的同時也要保證合適的環(huán)境。個人認為這個不是特別重要（不過也要看你的實驗粗放程度了  ），之前用水也做過，沒有很大的不同。至于合適的裂解液，一般文獻中都會有涉及到，可以試試。2.對于胞內蛋白，本人一般不用溶菌酶裂解細胞。 3.也沒有必要現配現用，一般4度保存是不會有很大問題的。主要是保證pH不能有很大變化，另外有沒有結晶或絮狀物出現等問題。 4.一般都是裂解液配合超聲破碎，也可以用加玻璃珠振蕩破碎。如果你只是為了檢測，可以超聲破碎也可以振蕩破碎。如果是為了后續(xù)實驗，能夠用振蕩破碎覺得會更好。玻璃珠用的是425-600um的，一般的生物公司都有賣，有點貴，一支酶的價錢吧，sigma的是160元/10g。 |
3樓2012-09-29 17:24:27
heshengfa
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4樓2012-10-01 09:44:03
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6樓2012-10-02 00:54:46
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