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馬上要開(kāi)始做CTAB提乳酸菌DNA了，各位大神幫忙看看實(shí)驗(yàn)步驟有木有啥致命問(wèn)題額
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將100ml培養(yǎng)液（LB培養(yǎng)）轉(zhuǎn)移至離心管中，12000rpm離心5min，棄上清。 2. 加入9.5mlTE懸浮沉淀，并加0.5ml10%SDS�；靹�37℃保溫1小時(shí)。 3. 加1.5ml 5mol/LNaCl，混勻。 4. 加1.5m CTAB/NaCl溶液，混勻，65℃保溫20分鐘。 5. 用等體積酚：氯仿：異戊醇（25：24：1）抽提，12000rpm離心10分鐘，將上清液移至干凈離心管。 6. 用等體積異戊醇：氯仿（1：24）抽提，12000rpm離心10分鐘，取上清液移至干凈管中。 7. 加入0.6-1倍體積異丙醇，-20℃靜置30min. 8. 12000rpm離心10min棄上清。 9. 將沉淀懸浮于10ml超純水中。 10. 加入等體積飽和酚/氯仿/異戊醇（25：24：1），上下顛倒數(shù)次混勻。 11. 12000rpm離心10min,吸取上相液體。 12. 加入等體積飽和氯仿/異戊醇（24：1），上下顛倒數(shù)次混勻。 13. 12000rpm離心10min,吸取上相液體。 14. 加入1/10體積3M NaAc，在加入2倍體積預(yù)冷的無(wú)水乙醇，-20℃放置30min. 15. 12000rpm離心15min,棄上清，用70%的乙醇洗滌沉淀。 16. 自然風(fēng)干后，加入1-2mlTE或者超純水溶解DNA。 大神們，現(xiàn)在實(shí)驗(yàn)室條件有限，我想著都用10000rpm多轉(zhuǎn)一會(huì)兒，不知道可行不？ |
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