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chen860729新蟲 (初入文壇)
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[求助]
細(xì)胞周期
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| 不同細(xì)胞的細(xì)胞周期怎么可以查到？ |
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jiangyinshen
木蟲 (著名寫手)
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2樓2012-10-08 09:11:54
郁離子1560
至尊木蟲 (著名寫手)
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- 專業(yè): 合成藥物化學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
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用流式做PI單染，根據(jù)熒光強(qiáng)度來判斷細(xì)胞所處的周期和處在某個周期的細(xì)胞數(shù)比例。 PI單染色檢測細(xì)胞周期 技術(shù)簡介： 在DNA直方圖上G0期細(xì)胞峰前出現(xiàn)一個亞二倍體細(xì)胞峰為凋亡細(xì)胞峰。凋亡細(xì)胞DNA被降解，小分子DNA可以通透細(xì)胞膜逸出細(xì)胞外，凋亡小體也可以帶走一小部分DNA，因而凋亡細(xì)胞DNA含量下降，由此導(dǎo)致對DNA染料的染色能力下降，在G0峰前呈現(xiàn)亞二倍體峰。 實驗步驟： 1．轉(zhuǎn)染目的載體48h后收集細(xì)胞樣品1X105個，900rpmX5min離心，棄去培養(yǎng)液。 2．各管加入PBS洗細(xì)胞一次。 3．離心去PBS，加入預(yù)冷的70%的無水乙醇固定。 4．離心去固定液，PBS重懸細(xì)胞5min。 5．篩網(wǎng)過濾，離心，棄去PBS 。 6． PI染液重懸細(xì)胞，4度避光30min。 7． 流式細(xì)胞儀檢測：PI用氬離子激發(fā)熒光，激發(fā)光波為488nm，發(fā)射光波長大于630nm，產(chǎn)生紅色熒光。 |
3樓2012-10-24 09:16:54
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