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wei_suzhen新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
如何克隆一段1200bp的真核基因，序列來(lái)自NCBI
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| 想從黑曲霉中提取一種酶的基因，從NCBI已查找到所需基因的序列，但是宿主菌株與我們的不同。因此想通過(guò)已查到的基因序列設(shè)計(jì)引物，來(lái)PCR從我們菌株提取的DNA，進(jìn)而檢測(cè)我們的菌株是不是也產(chǎn)這種酶。這段基因序列長(zhǎng)度是1257bp,含有兩個(gè)內(nèi)含子區(qū),而且這段序列內(nèi)部含有我們所加的酶切位點(diǎn)。通過(guò)軟件primer primer5設(shè)計(jì)的引物都不是從兩端開(kāi)始的，現(xiàn)在不知道怎樣設(shè)計(jì)引物來(lái)克隆這段序列的全長(zhǎng)？？ |
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bintaurus
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2樓2012-10-07 13:04:02
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-10-07 17:25:47
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| 個(gè)人感覺(jué)沒(méi)必要P那么長(zhǎng)，只是驗(yàn)證一下有沒(méi)有這個(gè)基因可以設(shè)計(jì)一下引物P個(gè)五六百bp就可以了，所以引物沒(méi)從兩頭開(kāi)始也沒(méi)關(guān)系的，另外用酶切位點(diǎn)的話應(yīng)該不可以與其本身含的酶切位點(diǎn)相同，最好換一下酶切位點(diǎn)，要想p全長(zhǎng)的話可以再兩端各取20bp讓后加上酶切位點(diǎn)和保護(hù)堿基，個(gè)人見(jiàn)解，希望對(duì)你有所幫助 |
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wei_suzhen3樓2012-10-07 15:15:22
wei_suzhen
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6樓2012-10-08 07:09:47
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