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wei_suzhen新蟲 (小有名氣)
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[求助]
如何克隆一段1200bp的真核基因，序列來自NCBI
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| 想從黑曲霉中提取一種酶的基因，從NCBI已查找到所需基因的序列，但是宿主菌株與我們的不同。因此想通過已查到的基因序列設(shè)計引物，來PCR從我們菌株提取的DNA，進(jìn)而檢測我們的菌株是不是也產(chǎn)這種酶。這段基因序列長度是1257bp,含有兩個內(nèi)含子區(qū),而且這段序列內(nèi)部含有我們所加的酶切位點。通過軟件primer primer5設(shè)計的引物都不是從兩端開始的，現(xiàn)在不知道怎樣設(shè)計引物來克隆這段序列的全長？？ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵應(yīng)助 2012-10-07 17:25:47
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵應(yīng)助 2012-10-07 17:25:47
| 個人感覺沒必要P那么長，只是驗證一下有沒有這個基因可以設(shè)計一下引物P個五六百bp就可以了，所以引物沒從兩頭開始也沒關(guān)系的，另外用酶切位點的話應(yīng)該不可以與其本身含的酶切位點相同，最好換一下酶切位點，要想p全長的話可以再兩端各取20bp讓后加上酶切位點和保護(hù)堿基，個人見解，希望對你有所幫助 |
wei_suzhen3樓2012-10-07 15:15:22
bintaurus
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4樓2012-10-07 20:44:14
5樓2012-10-07 23:33:47
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