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tomichelle1新蟲 (初入文壇)
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[求助]
請教基因敲除！SOS，help
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各位同學(xué)，請問利用化學(xué)法轉(zhuǎn)化后你們的單交換菌落多久能長出來？是否還要在雙抗板二次復(fù)篩？復(fù)篩后是否要做抗性松弛？為什么？松弛培養(yǎng)后是否會造成抗性丟失呢？在蔗糖板利用sacB反選時如何提高陽性率？蔗糖含量是否越高越好？是否需要蔗糖板兩次復(fù)篩？ 我的銅綠假單胞菌單交換后好幾天在抗生素平板上不長菌落，后來長出的經(jīng)蔗糖板反選后還是能在抗生素平板上生長，PCR結(jié)果顯示都是陰性菌落•••• |
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scelab
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問題太多，，， 單交換用抗性篩選，一定是多抗。時間長無所謂，從單細(xì)胞長成菌落，時間會很長。 蔗糖板sacB反選，有時是不必要的，可以換策略。從抗性角度篩。抗性長的話，就不是目標(biāo)菌株。多挑幾百個試試。 蔗糖不要超過10%。越高菌越難生長，滲透壓增加。。。 |
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tomichelle1
2樓2012-10-07 18:44:31
tomichelle1
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3樓2012-10-08 10:11:53
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