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tomichelle1新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
請(qǐng)教基因敲除！SOS，help
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各位同學(xué)，請(qǐng)問(wèn)利用化學(xué)法轉(zhuǎn)化后你們的單交換菌落多久能長(zhǎng)出來(lái)？是否還要在雙抗板二次復(fù)篩？復(fù)篩后是否要做抗性松弛？為什么？松弛培養(yǎng)后是否會(huì)造成抗性丟失呢？在蔗糖板利用sacB反選時(shí)如何提高陽(yáng)性率？蔗糖含量是否越高越好？是否需要蔗糖板兩次復(fù)篩？ 我的銅綠假單胞菌單交換后好幾天在抗生素平板上不長(zhǎng)菌落，后來(lái)長(zhǎng)出的經(jīng)蔗糖板反選后還是能在抗生素平板上生長(zhǎng)，PCR結(jié)果顯示都是陰性菌落•••• |
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tomichelle1
新蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
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送鮮花一朵 
3樓2012-10-08 10:11:53
scelab
榮譽(yù)版主 (文壇精英)
小木蟲(chóng)之有關(guān)部門(mén)負(fù)責(zé)人
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- 管轄: 微生物
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
amisking: 金幣+2, 鼓勵(lì)發(fā)帖交流問(wèn)題。 2012-10-07 19:59:01
tomichelle1: 金幣+5, ★★★很有幫助 2012-10-08 10:07:52
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
amisking: 金幣+2, 鼓勵(lì)發(fā)帖交流問(wèn)題。 2012-10-07 19:59:01
tomichelle1: 金幣+5, ★★★很有幫助 2012-10-08 10:07:52
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問(wèn)題太多，，， 單交換用抗性篩選，一定是多抗。時(shí)間長(zhǎng)無(wú)所謂，從單細(xì)胞長(zhǎng)成菌落，時(shí)間會(huì)很長(zhǎng)。 蔗糖板sacB反選，有時(shí)是不必要的，可以換策略。從抗性角度篩�？剐蚤L(zhǎng)的話，就不是目標(biāo)菌株。多挑幾百個(gè)試試。 蔗糖不要超過(guò)10%。越高菌越難生長(zhǎng)，滲透壓增加。。。 |
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2樓2012-10-07 18:44:31
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