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shiniyuanai新蟲 (小有名氣)
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[求助]
【求助】蛋白質(zhì)非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳
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最近我一直在跑蛋白質(zhì)的非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，已經(jīng)試過很多次，還是跑不好。 我的蛋白是pI為6.3~7.6的稻米蛋白，14kD~16kD，不止一種蛋白。參考王家政的蛋白技術(shù)手冊，用的是10%的分離膠和5%的濃縮膠，電泳緩沖液的pH是8.8，冰浴電泳，但是跑出來的效果非常不好，條帶如下，連濃縮膠里面都有條帶，但是跑SDS-PAGE的時(shí)候是好的�。�！圖片也貼在下面。 目標(biāo)蛋白 SDS-PAGE.png 目標(biāo)蛋白 Native-PAGE.png 脫色比較完全后在濃縮膠內(nèi)能看到拖尾的條帶。。。 |
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shiniyuanai7樓2012-10-09 19:48:26
cicelyzh
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shiniyuanai: 金幣+2, ★★★很有幫助, 非常感謝，真是好人 2012-10-09 15:19:07
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| 非變性電泳條件下，蛋白依靠的是本身的負(fù)電荷移動(dòng)，比起普通的SDS-PAGE，跑起來要慢得多。而且如果樣品濃度過高會(huì)引起聚合沉淀。從你的膠看來可能就是這種情況。你可以用一些較弱的非離子去垢劑（例如Triton X-100）增溶一下樣品。不知道你跑非變性膠的目的，是做in gel活性染色還是只想要分開不同的蛋白呢？ |
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3樓2012-10-09 14:53:18
shiniyuanai
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