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petrel932562銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
【求助/交流】 如何以已知肽鏈為模板，將其用用質(zhì)粒表達(dá)，并設(shè)計(jì)相應(yīng)的PCR引物
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標(biāo)題可能不能好好地總結(jié)我的意思，完整如下： 我想把一段15個(gè)氨基酸的肽<假設(shè)為UU>用一個(gè)表達(dá)質(zhì)粒表達(dá)出來，然后檢測(cè)是就會(huì)有DNA水平的測(cè)序，RNA水平的PCR、蛋白質(zhì)水平的WESTERN BLOT或者飛行質(zhì)譜。 現(xiàn)在牽涉的問題是不想合成特異性抗體的話（很貴，還沒有商品化針對(duì)這東西），就想做飛行質(zhì)譜，那怎么提取表達(dá)后的蛋白質(zhì)啊。。。。（我想設(shè)計(jì)的質(zhì)粒是雙表達(dá)的，它還會(huì)同時(shí)表達(dá)另一個(gè)蛋白<假設(shè)為PP>，它們到蛋白質(zhì)時(shí)候會(huì)分成2個(gè)蛋白質(zhì)的）就是這樣混合著2個(gè)蛋白的怎么把它們分開。還有就是在RNA水平時(shí)的PCR引物應(yīng)該怎么樣設(shè)計(jì)（各種大原則我知道。。。）我就覺得如果DNA序列定了，它的引物不也就定了么。。。在那段序列的2端開始弄個(gè)16~20個(gè)堿基序列作為引物嘛�。�！求各位大俠幫忙了。。。。金幣不多。。。。因?yàn)槲铱偣簿蜎]幾個(gè)。。。。。還要自留幾個(gè)求文獻(xiàn)的。。。。 |
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