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綠草如茵木蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
求原位雜交的技術(shù)protocol
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| 大家好,本人最近想做植物組織切片的原位雜交,以前做過(guò)都失敗了,現(xiàn)在還需要做,求具體的操作流程,謝謝!不勝感激! |

木蟲(chóng) (職業(yè)作家)
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1. 制片 2. 制片處理:滴加50-100µL 70%的甲酰胺(用2×SSC配置),蓋上蓋片。 80℃處理2min, 拿出后迅速甩掉蓋片。迅速依次放到-20℃預(yù)冷的梯度酒精中(70%,95%,100%酒精各5min或以上)。 3. 處理完自然干燥。 4. 配置雜交體系: 去離子甲酰胺 7.5µL 20×SSC 1.5µL ssDNA(鮭魚(yú)精DNA) 1.5µL B-DNA(封阻) 1µL 50%DS(葡聚糖) 3µL Probe(最后關(guān)燈加) 1µL 上述體系配置完成后,瞬時(shí)離心(閉光),然后80℃變性10min。變性完后,迅速放到冰上處理5min以上。 5. 把上述體系滴加到玻片上,蓋片,然后周?chē)可蠠o(wú)色指甲油保溫密封。放入37℃飯盒里反應(yīng)8h以上或過(guò)夜。 6. 用鑷子將指甲油剝掉,將標(biāo)本片浸入2×SSC的染色缸中,輕輕搖動(dòng)使蓋片脫落。 7. 再按照下列步驟清洗: 2×SSC 室溫 5min 2×SSC 42℃ 10min 2×SSC 室溫 5min 1×PBS 室溫 5min 離心管中加入0.5-1%抗小牛血清(用1×PBS配置)100µL,再加入1µL Fab,斡旋混勻,滴加到蓋片上(滴加時(shí)標(biāo)本不要太干燥),蓋上蓋片,37℃條件下,45min或以上。 8. 按照步驟7清洗 9. 自然閉光干燥后滴加PI,蓋上蓋片鏡檢。 |
木蟲(chóng) (小有名氣)

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