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watersr427新蟲 (初入文壇)
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[求助]
PCR 溶解曲線亂、ct值高 怎么辦
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新手一枚，RT-PCR不理想，溶解曲線亂且ct值高，望各位高人指導(dǎo)！感激不盡！ 腦組織RNA濃度 樣本一：2200ng/ul 260/280 1.84； 樣本二：11000ng/ul 260/280 1.94； 樣本三：2400ng/ul 260/280 1.87； 第二天，調(diào)整濃度至1000ng/ul，逆轉(zhuǎn)錄 第三天，擴增 SYBR Premix Ex Taq II 10 ul PCR Forward Primer 0.8 ul PCR Reverse Primer 0.8 ul DNA模版 2.0 ul dH2O 6.4 ul Total 20 ul stage1：95℃ 30s 20℃/s 1 Cycle stage2：95℃ 5s 20℃/s 62℃ 20s 20℃/s 40 Cycle 內(nèi)參和目的ct值都在30以上 |
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watersr427
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