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Mr泡面金蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
關(guān)于DTNB的使用
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本人正在做酶的巰基含量測(cè)定，查了很多文獻(xiàn)都是用DTNB對(duì)酶巰基數(shù)目進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)幾個(gè)問(wèn)題： 1、原先是用pH6.8的緩沖液配制的DTNB與脲酶進(jìn)行反應(yīng)，結(jié)果在412nm處不顯顏色。2、改在pH8的緩沖液中脲酶與DTNB進(jìn)行反應(yīng)，發(fā)現(xiàn)隨著DTNB的濃度越高，反應(yīng)液顯色越深，但是本底（脲酶的配制溶液+DTNB液）也基本顯示一樣的顏色。 3、懷疑DTNB在pH8的液體中會(huì)顯色，所以直接把DTNB調(diào)至pH=8，也顯示一樣的顏色。 4、之前也有用過(guò)半胱氨酸和DTNB在pH6.8的時(shí)候進(jìn)行反應(yīng)，結(jié)果馬上顯色，在412nm處有很高的吸光度。 想問(wèn)一下各位，DTNB的使用pH有沒(méi)有什么特殊的要求，是不是在pH8或者某個(gè)pH值下會(huì)有顯色呢？還有，脲酶算不算巰基豐富的酶，我查了很多文獻(xiàn)，基本上人家測(cè)脲酶中的巰基都是用DTNB的，求解答，謝謝  [ Last edited by Mr泡面 on 2012-10-19 at 17:01 ] |
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 乙酰膽堿酯酶 |
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2樓2012-10-19 22:11:54
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4樓2012-10-20 09:15:25
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5樓2012-10-20 12:17:13
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6樓2012-10-20 18:27:15
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你看看文獻(xiàn)一般DTNB加多少？一般可能20倍蛋白的量就好，你的buffer pH是多少��？你可以單掃一下DTNB，然后掃一下DTNB加蛋白，我覺(jué)得你有可能DTNB量太高了，給你發(fā)一篇文獻(xiàn)，你看看，http://www.jbc.org/content/276/36/33588.full |
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Mr泡面7樓2012-10-21 04:51:51
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8樓2012-10-21 09:41:34
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